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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取不出来
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yanggoing

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取不出来 已有3人参与

最近新购买了大肠杆菌，里面的质粒怎么也提取不出来。还麻烦高手帮我看看是什么原因所致。加了抗生素能生长，且也没有污染杂菌。提取过程如下，挑取单菌落于1ml LB培养基培养4小时，后转移50ul至25ml LB中过夜培养，菌量也看过，没有问题。用的是天根试剂盒提取，步骤都是按它上面的做，后面检测总是没有条带。请各位高手帮我看看是什么原因，谢谢
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1楼 2014-10-08 10:57:01
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yanggoing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 生物是个坑 at 2014-10-08 15:49:04
提完建议测下浓度，你说的检测是跑的电泳？按照你的秒杀若是操作没有问题那么换换试剂盒或者是传统方法SDS碱裂解法做一次试试。

好的 谢谢
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5楼2014-10-08 21:01:48
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yanggoing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2014-10-08 19:09:02
楼主，你的大肠杆菌确实里面有质粒对吗？？？
没有用过天根的试剂盒，我们用的索莱宝，不过试剂盒的问题应该不是主要的吧？？没过期吧？？溶液I加入酶了吗？

试剂盒没有过期 也加酶了 不知道是什么原因 谢谢你
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6楼2014-10-08 21:05:47
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yanggoing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 白风 at 2014-10-08 16:29:53
建议换个试剂盒试试。

好的 谢谢
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7楼2014-10-08 21:06:49
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yanggoing

金虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by sunxijunim at 2014-10-09 15:23:19
你的是什么菌株呀，可能是G+ ，也许你没注意。再有可能就是你的质粒需要诱导一下大量复制吗？
低拷贝的质粒你可以培养一段时间后加入氯霉素，之后再过三到四个小时提质粒。按照说明书的步骤一步一步来。
如果还有 ...

是大肠杆菌。好的，谢谢
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15楼2014-10-10 22:16:01
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yanggoing

金虫 (小有名气)
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12楼: Originally posted by qiahaoo at 2014-10-10 13:20:48
之前提质粒也提不出后来发现是用试剂盒提的时候裂解不充分，后来就在说明书的基础上适当增加裂解时间就好了

请问你们裂解多长时间？
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16楼2014-10-10 22:17:24
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yanggoing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by Albert_Ren at 2014-10-10 14:10:27
怀疑你的菌有问题，如果里面压根没有质粒你是提不出来的，这个需要确定。

这是刚买到的，也不知道里面到底有没有。正在发回商家让他们看看
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17楼2014-10-10 22:21:30
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