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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 提取质粒相关问题!质粒时丢失了吗?
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well_想太多

新虫 (小有名气)

[求助] 提取质粒相关问题!质粒时丢失了吗? 已有1人参与

别人给了我一管含有质粒的甘油管,我直接从中取菌液接到3ml液体LB培养基中(含抗性)摇菌,提了两次质粒,结果是都没有提出来,但是在300bp-500bp位置有明显的RNA条带(未加RNAase).所以我又采取了划线的方法(含抗性),现在培养了12h却没有长出东西.抗性是氨苄.甘油管在-20℃保存了大约3个月,不至于丢失吧?我先前以为是自己刚提质粒所以手法不行,但现在不确定具体什么原因了,请大家帮忙分析一下.
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1楼 2014-09-14 21:36:56
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miaoshuang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-14 23:49:23
如果抗生素没弄错的话，那应该是菌的问题了，菌可能被污染了
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努力，勇敢向前走，一切皆有可能
2楼2014-09-14 22:11:58
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well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by miaoshuang at 2014-09-14 22:11:58
如果抗生素没弄错的话，那应该是菌的问题了，菌可能被污染了

平板长了24小时,长出了菌落,但是我不确定这是不是含质粒的菌了?
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3楼2014-09-15 11:39:48
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miaoshuang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by well_想太多 at 2014-09-15 11:39:48
平板长了24小时,长出了菌落,但是我不确定这是不是含质粒的菌了?...

你用的菌是大肠杆菌吗？也可能是菌的活力不行了，你可以提一下质粒，再次转化一下大肠杆菌，利用抗生素筛选试一下
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努力，勇敢向前走，一切皆有可能
4楼2014-09-15 16:51:13
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well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by miaoshuang at 2014-09-15 16:51:13
你用的菌是大肠杆菌吗？也可能是菌的活力不行了，你可以提一下质粒，再次转化一下大肠杆菌，利用抗生素筛选试一下...

是大肠,我又拿保存的甘油管划了一次平板,发现12小时后还是没有长出单菌落,但是能看出长出菌了,不知道这是不是含有质粒的菌,不用单菌落摇菌可以吗?
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5楼2014-09-16 10:03:12
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miaoshuang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by well_想太多 at 2014-09-16 10:03:12
是大肠,我又拿保存的甘油管划了一次平板,发现12小时后还是没有长出单菌落,但是能看出长出菌了,不知道这是不是含有质粒的菌,不用单菌落摇菌可以吗?...

长的不是单菌落吗？那应该是杂菌了吧，你的菌是不是有问题了？从新转化吧
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努力，勇敢向前走，一切皆有可能
6楼2014-09-17 10:46:24
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