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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的基因是否从质粒上掉落下来
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wangweijian

金虫 (小有名气)

[求助] 目的基因是否从质粒上掉落下来 已有3人参与

工程菌提取质粒，跑电泳可以看到质粒条带很亮，但是做PCR验证质粒里面是否含有目的基因时，几乎没有PCR产物，是不是目的基因从质粒上掉落了？
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1楼 2014-04-11 13:35:18
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wangweijian(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-11 14:35:27
掉下来?是质粒的不相容性，阳性丢失，空质粒

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-04-11 13:42:42
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangweijian(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-11 14:35:48
wangweijian: 金币+3, ★★★很有帮助, 可能是高浓度的质粒会抑制PCR反应，我稀释下看看 2014-04-12 10:14:20
哈哈，那质粒为啥就喜欢把你的片段丢了？？。。。它怎么知道你的片段长在哪？你的片段两侧有同源序列吗？即便有，常规分子克隆的宿主菌都是重组缺陷型的，一些病毒载体因为必须带上LTR，也没见全部丢掉的。
质粒PCR没有产物，得看你有没有阳性对照。
再说，既然质粒都抽出来了，最好酶切鉴定。这个是金标准。

另，质粒相容不相容，主要取决于复制子，跟质粒的其他元件无关。
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3楼2014-04-11 14:14:30
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wangweijian: 金币+1, ★有帮助, 刚构建好时验证过，是好的，只是保存了一段时间就出现这种问题 2014-04-12 10:15:11
引用回帖:
3楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-11 14:14:30
哈哈，那质粒为啥就喜欢把你的片段丢了？？。。。它怎么知道你的片段长在哪？你的片段两侧有同源序列吗？即便有，常规分子克隆的宿主菌都是重组缺陷型的，一些病毒载体因为必须带上LTR，也没见全部丢掉的。
质粒PC ...

有可能工程菌本身就是转了空载体进去而被你保存了

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-04-11 14:25:49
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-11 14:25:49
有可能工程菌本身就是转了空载体进去而被你保存了
...

这种乌龙事件另当别论。。。
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5楼2014-04-11 14:32:05
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