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xulu2008

金虫 (正式写手)

[求助] 重建质粒之目的基因

目的基因(700bp)经双酶切是直接用试剂盒纯化,还是跑电泳切胶再用试剂盒纯化呢?
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切完之后,反应体系中的DNA片段很杂,最好电泳之后切胶再用试剂盒纯化。
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
2楼2012-10-29 12:39:06
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chensusu912

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
介意先跑胶再回收,反正跑个胶也不花多少时间
3楼2012-10-29 13:08:57
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leerokr

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-29 15:57:55
pcr产物纯化也可以,虽然是可能回收到酶切出来短的十几bp片段,但是,十几bp片段一般来说,回收效率是非常低,我做lic的时候,就是直接pcr产物纯化,然后三个片段一起连,一样可以成功。。如果你的片段浓度ok,还是建议是跑胶回收 ,这样就不会存在十几bp 的片段而影响连接效率了
4楼2012-10-29 14:24:42
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先要确定你的PCR产物杂带多不?如果条带单一,那用什么方法都行,反之,用切胶回收!
生物化学与分子生物学
5楼2012-10-29 14:34:54
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review

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先跑胶再回收  我们都是这样的
交流
6楼2012-10-29 16:46:36
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yandz680717

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-30 15:49:23
最好电泳,再切胶用试剂盒纯化。如果用PCR纯化试剂盒纯化PCR产物,获得的DNA就含有模版,如果模板是质粒,就很危险,很难得到重组的质粒。想想为什么?
7楼2012-10-30 07:16:33
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