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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重建质粒之目的基因
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xulu2008

金虫 (正式写手)

[求助] 重建质粒之目的基因

目的基因（700bp）经双酶切是直接用试剂盒纯化，还是跑电泳切胶再用试剂盒纯化呢？
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1楼2012-10-29 12:09:39
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yandz680717

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-30 15:49:23
最好电泳，再切胶用试剂盒纯化。如果用PCR纯化试剂盒纯化PCR产物，获得的DNA就含有模版，如果模板是质粒，就很危险，很难得到重组的质粒。想想为什么？
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7楼2012-10-30 07:16:33
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切完之后，反应体系中的DNA片段很杂，最好电泳之后切胶再用试剂盒纯化。
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
2楼2012-10-29 12:39:06
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chensusu912

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
介意先跑胶再回收，反正跑个胶也不花多少时间
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3楼2012-10-29 13:08:57
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leerokr

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-29 15:57:55
pcr产物纯化也可以，虽然是可能回收到酶切出来短的十几bp片段，但是，十几bp片段一般来说，回收效率是非常低，我做lic的时候，就是直接pcr产物纯化，然后三个片段一起连，一样可以成功。。如果你的片段浓度ok，还是建议是跑胶回收 ，这样就不会存在十几bp 的片段而影响连接效率了
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4楼2012-10-29 14:24:42
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