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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 本来带有质粒的大肠杆菌再对它进行一次质粒转化能达到增加质粒拷贝数的目的吗？
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 本来带有质粒的大肠杆菌再对它进行一次质粒转化能达到增加质粒拷贝数的目的吗？

本来带有质粒的大肠杆菌再对它进行一次质粒转化能达到增加质粒拷贝数的目的吗？我的大肠杆菌是带有目的蛋白表达质粒的，但是我导师说再对这个菌株进行一次质粒转化来强化一下，我就纠结了，能达到强化的目的吗？有做过类似实验的虫子吗？求赐教，金币不是问题啦^_^
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好孩子！
1楼2012-04-26 09:19:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zwtcchh

新虫 (初入文坛)
我老板也让我这样做过，是比原来增加了些
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9楼2013-03-01 12:09:47
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普通回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-26 15:55:20
zhang8826857: 金币+4, ★有帮助 2012-06-11 10:56:53
这个应该不可以吧，质粒的拷贝数是由质粒的复制子类型决定的，每次转化的时候只有一个质粒进入细胞，然后质粒再复制，你这个本身都有一样的质粒，这还涉及到一个质粒不相容的问题，反正归根结底还是一个质粒在里面，个人感觉用基础知识来回答的话，没有可能增加吧。
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2楼2012-04-26 09:48:12
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-26 15:55:39
zhang8826857: 金币+3, ★有帮助 2012-06-11 10:57:00
你两次转化的质粒都是同一个质粒吗？
任何两种含有相似复制子结构的不同质粒，不能同时存在于一个细胞中，这是质粒的不相容性。
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未来不是梦
3楼2012-04-26 10:17:26
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-26 15:56:05
zhang8826857: 金币+3, ★有帮助 2012-06-11 10:57:11
你老板的意思应该是怕质粒丢失吧，因为一个菌多次转接，有可能造成菌体的抗性，那样质粒上的抗性基因就不起作用了，质粒就丢了。。。特别是Amp的时候

再转一次会好点
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小木虫之有关部门负责人
4楼2012-04-26 11:43:27
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
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西瓜: 金币+2, 专家考核, 鼓励交流 2012-04-26 21:45:41
你们老板真给力哦。。。
你的目的是什么？就是将你的蛋白表达量提高。。。
可是增加蛋白表达量貌似不是酱紫吧。。。
应该摸索诱导其表达的条件才是正道。。。或者换载体等等。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2012-04-26 18:53:36
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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zhang8826857: 金币+3, ★有帮助 2012-06-11 10:57:29
由于大肠杆菌繁殖快，在适宜的条件下繁殖一代仅需要20~30分钟，而且常用质粒可以在大肠杆菌中达到几百个拷贝，因此，通过对转化成功的大肠杆菌培养，可以在短时内极大地扩增目的质粒。
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6楼2012-04-28 15:21:21
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547star

木虫 (著名写手)
你如何确定转化平板上长出来的菌落有没有转进新的质粒?
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为什么
7楼2012-05-04 13:07:54
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meiting

木虫 (正式写手)

新手上路

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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zhang8826857: 金币+3, ★有帮助 2012-06-11 10:57:42
指的是相同的质粒？我觉得这个应该可以吧，在做转化的是，一个细胞肯定是接收很多个质粒的。但是多少数量和质粒本身的特性有关系，这就是为什么质粒会有高拷贝数和地拷贝数的差别。你可以开始就加大质粒的浓度，或者像你导师所说的再转一次。
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目前的我们谁也改变不了，能做的只是充实自己，改变自己……
8楼2012-05-05 21:44:31
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547star

木虫 (著名写手)
怎么区分转进去了还是没转进去了,都有相应的抗性.转不转,没抗性的突变,在抗性培养基和平板就不长了.纯粹是安慰自己的做法.
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为什么
10楼2013-05-11 10:23:54
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