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wangweijian金虫 (小有名气)
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[求助]
目的基因是否从质粒上掉落下来 已有3人参与
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| 工程菌提取质粒，跑电泳可以看到质粒条带很亮，但是做PCR验证质粒里面是否含有目的基因时，几乎没有PCR产物，是不是目的基因从质粒上掉落了？ |
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biostar2009
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5楼2014-04-11 14:32:05
for5
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2楼2014-04-11 13:42:42
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【答案】应助回帖
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wangweijian(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-11 14:35:48
wangweijian: 金币+3, ★★★很有帮助, 可能是高浓度的质粒会抑制PCR反应，我稀释下看看 2014-04-12 10:14:20
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哈哈，那质粒为啥就喜欢把你的片段丢了？？。。。它怎么知道你的片段长在哪？你的片段两侧有同源序列吗？即便有，常规分子克隆的宿主菌都是重组缺陷型的，一些病毒载体因为必须带上LTR，也没见全部丢掉的。 质粒PCR没有产物，得看你有没有阳性对照。 再说，既然质粒都抽出来了，最好酶切鉴定。这个是金标准。 另，质粒相容不相容，主要取决于复制子，跟质粒的其他元件无关。 |
3楼2014-04-11 14:14:30
Neo2000
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4楼2014-04-11 14:25:49
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