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有人做过双报告基因的过表达质粒载体么？ 已有1人参与
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目前实验安排是将一个基因片段A，将其加载于一个质粒载体上后，E.coli扩增后用脂质体转染细胞，但是为了方面检测想做双报告基因的过表达，加上GFP/Fluc之类的东西。目前这些方面一些问题很不清楚： 1、最重要的是，目前是否有人做“红/绿荧光蛋白+荧光素酶+过表达功能基因（该处实际有三个蛋白的表达）”的质粒？要是有的话，直接借来或者买来，加上自己的基因也行啊，O(∩_∩)O哈哈~。不过发现好多公司都是只有一种报告基因，然后可以加上目的片段的。在质粒的结构中，要是表达这三种基因，是不是每种基因都有自己的启动子之类的，因此插入一个基因不是简单的数学上1+1作用？而是还得设计相应的结构。 2、查了发现，有真核细胞表达载体和原核表达载体，我这里貌似用的先要在E.coli里大量扩增，然后用于真核细胞转染，这种选择的是那种质粒载体，具体有哪一些具体的质粒啊？ 菜鸟希望大家多多提供意见和建议。 再次求助：有谁有可以表达双报告基因的质粒载体？跪求实验室名字或者一些文章，国内的，O(∩_∩)O~ |
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zhen022(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 16:52:02
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你的问题我曾经思考过， Promega作为Luciferase报告基因的大头，他有一套质粒叫做psiCheck，其中的psiCheck-2即在同一个骨架上有Renilla Luciferase和firefly Luciferase两个报告基因。 仔细观察这个载体的设计思路其实很简单，就是两个真核启动子，两个polyA信号，包括两个转录本。你可以自己装入你想要的基因，比如GFP、RFP之类的。 但是一个原则就是，为了防止在细菌中的同源重组，要求这些相同功能的元件不能用两次，比如psiCheck-2中用的是SV40和HSV-TK两个真核启动子，配套synthetic polyA和SV40 polyA signal。 |
5楼2014-03-13 13:24:03
武穆大成
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