| 查看: 2898 | 回复: 5 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
有人做过双报告基因的过表达质粒载体么？ 已有1人参与
|
||||
|
目前实验安排是将一个基因片段A，将其加载于一个质粒载体上后，E.coli扩增后用脂质体转染细胞，但是为了方面检测想做双报告基因的过表达，加上GFP/Fluc之类的东西。目前这些方面一些问题很不清楚： 1、最重要的是，目前是否有人做“红/绿荧光蛋白+荧光素酶+过表达功能基因（该处实际有三个蛋白的表达）”的质粒？要是有的话，直接借来或者买来，加上自己的基因也行啊，O(∩_∩)O哈哈~。不过发现好多公司都是只有一种报告基因，然后可以加上目的片段的。在质粒的结构中，要是表达这三种基因，是不是每种基因都有自己的启动子之类的，因此插入一个基因不是简单的数学上1+1作用？而是还得设计相应的结构。 2、查了发现，有真核细胞表达载体和原核表达载体，我这里貌似用的先要在E.coli里大量扩增，然后用于真核细胞转染，这种选择的是那种质粒载体，具体有哪一些具体的质粒啊？ 菜鸟希望大家多多提供意见和建议。 再次求助：有谁有可以表达双报告基因的质粒载体？跪求实验室名字或者一些文章，国内的，O(∩_∩)O~ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有77人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 荧光蛋白原核表达质粒
已经有13人回复
- 目的基因连接表达载体的质粒PCR验证，结果出现2条带
已经有10人回复
- 关于Pet28a载体构建的质粒，蛋白表达量低是怎么回事。请大家帮忙
已经有8人回复
- 带GFP的重组表达载体，GFP蛋白会不会影响目的基因表达的蛋白？
已经有20人回复
- 报告基因GFP的检测方法
已经有6人回复
- 如何提高连接效率呢？
已经有26人回复
- 关于农杆菌单菌株/双质粒表达载体的构建问题
已经有14人回复
- 怎样在表达载体质粒接上His tag标签
已经有8人回复
- 逆转录病毒载体的质粒是否可用普通的方法做转染？？
已经有4人回复
- 关于酵母启动子和质粒的问题
已经有5人回复
- 荧光素酶报告基因的内参质粒选择
已经有3人回复
- 【求助/交流】转染pNFκB-luc(报告基因质粒)需要共转染一个内参质粒的作用
已经有7人回复
- 【求助/交流】表达载体转化后,提取的质粒和原来不一样了啊
已经有5人回复
- 【求助/交流】基因插入质粒敲除，为什么质粒有正向插入和反向插入呢
已经有7人回复
- 【求助/交流】双荧光素酶报告系统出现几个问题，求解答，谢谢。
已经有4人回复
- 【求助/交流】请教有关双报告基因检测
已经有4人回复
- 【求助/交流】在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子？
已经有6人回复
- 【转帖】两基因控制西红柿保鲜期
已经有13人回复
武穆大成
木虫 (著名写手)
笨蛋
- 应助: 79 (初中生)
- 金币: 3516.5
- 散金: 344
- 红花: 3
- 帖子: 1574
- 在线: 230小时
- 虫号: 1743585
- 注册: 2012-04-08
- 专业: 免疫生物学
6楼2015-09-23 16:30:37
yang0071
木虫 (职业作家)
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-12-03 08:30:26
clcl88
银虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 464.6
- 散金: 1
- 帖子: 140
- 在线: 307.2小时
- 虫号: 2551375
- 注册: 2013-07-18
- 性别: MM
- 专业: 植物生理与生化
3楼2013-12-03 08:58:53
biostar2009
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +220 - MolEPI: 20
- 应助: 231 (大学生)
- 金币: 10415.9
- 散金: 387
- 红花: 63
- 帖子: 540
- 在线: 151.9小时
- 虫号: 2811882
- 注册: 2013-11-19
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★
zhen022(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 16:52:02
zhen022(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 16:52:02
|
你的问题我曾经思考过， Promega作为Luciferase报告基因的大头，他有一套质粒叫做psiCheck，其中的psiCheck-2即在同一个骨架上有Renilla Luciferase和firefly Luciferase两个报告基因。 仔细观察这个载体的设计思路其实很简单，就是两个真核启动子，两个polyA信号，包括两个转录本。你可以自己装入你想要的基因，比如GFP、RFP之类的。 但是一个原则就是，为了防止在细菌中的同源重组，要求这些相同功能的元件不能用两次，比如psiCheck-2中用的是SV40和HSV-TK两个真核启动子，配套synthetic polyA和SV40 polyA signal。 |
5楼2014-03-13 13:24:03
