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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 带GFP的重组表达载体，GFP蛋白会不会影响目的基因表达的蛋白？
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natureandsci

金虫 (小有名气)

[交流] 带GFP的重组表达载体，GFP蛋白会不会影响目的基因表达的蛋白？

在用EGFP质粒连接目的基因构建重组表达质粒研究某基因的功能时，GFP蛋白会不会影响目的基因表达的蛋白的结构和功能？或者影响有多大？
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1楼 2012-12-16 16:59:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

pennchem

专家顾问 (正式写手)
★ ★ ★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-17 15:29:43
（1）最好的办法是纯化出来，做活性检测对比，这样最直接
（2）否则加足够长的linker，做一个实验把GFP放在N-端，另一个放在C-端，再做GFP作为阴性的对照
（3）有的GPF是可以形成多聚体的，如果是这样的质粒，需要做一些点突变，这样就可以得到单体的GFP，依然有荧光。
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10楼2012-12-17 10:02:26
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timmychina

铁杆木虫 (正式写手)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
flag肯定会影响目的蛋白的一些性质，但可以忽略其影响。标签要连载目的蛋白的C端。
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7楼2012-12-17 09:45:04
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普通回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
应该不会，我也在做这个，实验设计初期就是想通过GFP来检测基因表达的，所以影响不会很大，但是之前在做细胞系的时候想到加个报告基因，但是老板说因为要建立稳定的细胞系，所以加报告基因不好，然后就是传统的RT，WB检测了
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2楼2012-12-16 21:38:57
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1514132

至尊木虫 (著名写手)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
应该是没什么事的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2012-12-16 22:11:14
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readytogo

荣誉版主 (文学泰斗)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
估计不会吧，有个师弟做这个
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4楼2012-12-16 22:13:13
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lostdipper

新虫 (初入文坛)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
有的蛋白脸上后会影响蛋白折叠从而影响功能的
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6楼2012-12-16 22:35:41
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jl860822

金虫 (正式写手)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
这个没有人做过研究，楼主可以做个实验试一下，没准可以发文章呢
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12楼2012-12-18 19:41:04
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hemabaobao

铁杆木虫 (正式写手)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
距离太紧肯定会影响

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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13楼2012-12-19 01:05:52
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fuding6

木虫 (小有名气)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
凡事都要去实践了才能知道结果
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14楼2012-12-19 10:47:10
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547star

木虫 (著名写手)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
融合表达一般会有一些影响，有些表达更高，有些表达变低。
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16楼2013-08-02 10:29:09
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珍真善美

新虫 (初入文坛)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
我也想知道这个问题，请问楼主最终怎么做的
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17楼2014-09-12 18:06:43
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yww2012

银虫 (小有名气)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
个人感觉10楼说的有道理，两种蛋白会不会相互影响，需看具体在什么样的条件下。
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18楼2014-09-18 11:08:59
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查无此人lyp

新虫 (正式写手)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
应该是会影响的，毕竟GFP蛋白20多呢，不小
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19楼2015-03-20 10:38:02
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moon流风

新虫 (初入文坛)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
有可能。因为GFP有20多kd。确定会不会有影响，做互补实验。
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20楼2015-05-06 15:34:55
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ddtao

新虫 (小有名气)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
建议用Polycysteine-dendritic poly(His,Arg)1:5试一试
http://www.novel-polylysine.com/main/home/htm.php?nowmenuid=2
huiyisu@126.com
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21楼2016-04-02 12:50:20
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yaoyao1455楼
2012-12-16 22:17   回复  
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159290684508楼
2012-12-17 09:54   回复  
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xiaofuyu9楼
2012-12-17 09:56   回复  
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
wgatssd11楼
2012-12-17 10:04   回复  
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zhanqgao15楼
2013-05-07 09:04   回复  
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
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