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natureandsci

金虫 (小有名气)

[交流] 带GFP的重组表达载体，GFP蛋白会不会影响目的基因表达的蛋白？

在用EGFP质粒连接目的基因构建重组表达质粒研究某基因的功能时，GFP蛋白会不会影响目的基因表达的蛋白的结构和功能？或者影响有多大？
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1楼2012-12-16 16:59:47
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★ ★ ★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-17 15:29:43
（1）最好的办法是纯化出来，做活性检测对比，这样最直接
（2）否则加足够长的linker，做一个实验把GFP放在N-端，另一个放在C-端，再做GFP作为阴性的对照
（3）有的GPF是可以形成多聚体的，如果是这样的质粒，需要做一些点突变，这样就可以得到单体的GFP，依然有荧光。
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10楼2012-12-17 10:02:26
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
应该不会，我也在做这个，实验设计初期就是想通过GFP来检测基因表达的，所以影响不会很大，但是之前在做细胞系的时候想到加个报告基因，但是老板说因为要建立稳定的细胞系，所以加报告基因不好，然后就是传统的RT，WB检测了
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2楼2012-12-16 21:38:57
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1514132

至尊木虫 (著名写手)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
应该是没什么事的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2012-12-16 22:11:14
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readytogo

荣誉版主 (文学泰斗)
★
natureandsci(金币+1): 谢谢参与
估计不会吧，有个师弟做这个
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4楼2012-12-16 22:13:13
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