应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于GFP融合的蛋白的一些问题
81/1返回列表
查看: 2428  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zplipeng

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于GFP融合的蛋白的一些问题

各位高人，想把GFP基因融合的已有蛋白的后面，问一下比较弱的几个问题：
1、GFP融合基因都是融合的整个基因么？还是其中的一段呢？
2、是不是不能破坏GFP基因的起始ATG啊？
3、需要注意那些方面的问题恩？
多谢多谢啦。。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-20 16:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):辛苦 2010-12-20 17:08:48
融合蛋白的意思是一起转录一起翻译，然后两个蛋白是黏在一起不是分开的
你的目的蛋白翻译出来就会在C或N端带了GFP，看你的质粒怎么设计的
一般ATG质粒上面有了（不然就自己设计）
而且多克隆位点都不会在GFP内部所以不会破坏GFP的起始密码子
就按照普通的表达蛋白的克隆做就行了
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-12-20 16:53:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zplipeng

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-20 16:53:13:
融合蛋白的意思是一起转录一起翻译，然后两个蛋白是黏在一起不是分开的
你的目的蛋白翻译出来就会在C或N端带了GFP，看你的质粒怎么设计的
一般ATG质粒上面有了（不然就自己设计）
而且多克隆位点都不会在GFP内 ...

意思就是：我直接在要表达蛋白的C端按照不移码原则连接上GFP就可以了，是这样吧！！！多谢了！！
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-20 19:30:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
zplipeng(金币+3): 2010-12-20 21:28:48
引用回帖:
Originally posted by zplipeng at 2010-12-20 19:30:16:

意思就是：我直接在要表达蛋白的C端按照不移码原则连接上GFP就可以了，是这样吧！！！多谢了！！

你的质粒不带GFP的吗？如果自己连，注意不要把poly A信号加在两个之间了，否则就杯具
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-20 19:52:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2):好久不见。 2010-12-20 20:54:12
zplipeng(金币+3): 2010-12-20 21:29:52
有现成的GFP载体，直接连到clone位点就ok了，如果重新构建，一般注意是连到基因的N terminal和C terminal会有不同的效果，所以，一定要有control作对照，还有不要破坏GFP的起始密码子
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-12-20 20:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zplipeng

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-20 19:52:04:


你的质粒不带GFP的吗？如果自己连，注意不要把poly A信号加在两个之间了，否则就杯具

对，是自己连。。多谢多谢啦
赞一下 回复此楼
6楼2010-12-20 21:28:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zplipeng

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by sutao1979 at 2010-12-20 20:41:44:
有现成的GFP载体，直接连到clone位点就ok了，如果重新构建，一般注意是连到基因的N terminal和C terminal会有不同的效果，所以，一定要有control作对照，还有不要破坏GFP的起始密码子

对照应该怎么设计呢？就是连在两端看有分别有什么影响么？
赞一下 回复此楼
7楼2010-12-20 21:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流！:tiger06: 2010-12-20 23:32:04
zplipeng(金币+4):好的，明白了！多谢了。。。 2010-12-21 14:26:30
引用回帖:
Originally posted by zplipeng at 2010-12-20 21:29:43:

对照应该怎么设计呢？就是连在两端看有分别有什么影响么？

有啊，有些蛋白很奇怪的，融合了东西就没功能了……有的只能融合在C有的只能在N……
所以你应该设计，空质粒、插入目的片段的质粒、融合在C、融合在N、只有GFP的组。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-12-20 21:33:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zplipeng 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭