应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白降解的问题
121/2返回列表12下一页
查看: 3053  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

101202139

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白降解的问题

最近表达融合蛋白，然后将融合标签用酶切除，可是不知为什么酶切产物之一目的蛋白在跑SDS-PAGE后发现条带较弱，按道理的话，酶切一定量的融合蛋白，应该产生相同质量的融合标签和目的蛋白，再体积一致的情况下，浓度应该也是差不多的。我尝试将储存在零下20度一段时间的酶切产物重新跑SDS-PAGE，发现目的蛋白更弱了。不知为什么？望各位虫友不吝指教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-30 09:37:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

101202139

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by vcitor宇8 at 2013-04-08 13:38:08
你好，不知道你现在问题解决了吗？我目前也在做这个，酶切过后怎么把酶除去呢？谢谢...

我发现的问题是当时纯化目的蛋白，进行超声破碎的时候没有添加EDTA这种金属螯合剂，造成菌体内部的其它蛋白酶降解了我的目的蛋白。希望对你有帮助！
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2013-04-08 18:13:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

shuifen1108

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 2011-06-30 18:49:23
101202139(金币+2): 2011-06-30 21:37:37
切除融合标签所用的酶如Xa因子、凝血酶、肠激酶、凝乳酶、胶原酶。这些酶可能会使目的蛋白其他部位发生断裂，或者是你在酶切后纯化目的蛋白的过程中出问题了
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-30 13:28:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 2011-06-30 18:49:30
专一的酶不一定专一的，专一性是有条件的。另外污染微生物会产生蛋白酶导致降解的。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-30 13:58:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 2011-06-30 18:49:36
蛋白在-20时降解还是挺厉害的，以前我也存-20后来存-80了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-30 17:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

101202139

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shuifen1108 at 2011-06-30 13:28:01:
切除融合标签所用的酶如Xa因子、凝血酶、肠激酶、凝乳酶、胶原酶。这些酶可能会使目的蛋白其他部位发生断裂，或者是你在酶切后纯化目的蛋白的过程中出问题了

我用的内切酶是TEV酶，这种酶的专一性还是比较好的，目的蛋白上不会存在酶切位点。我是将纯化后的蛋白酶切后，跑SDS-PAGE，酶切产物还没有过柱子。
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-30 21:35:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

101202139

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-30 13:58:06:
专一的酶不一定专一的，专一性是有条件的。另外污染微生物会产生蛋白酶导致降解的。

TEV蛋白酶的专一性是有目共睹的，我的酶切缓冲液是经过高压灭菌的！
赞一下 回复此楼
6楼2011-06-30 21:42:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
你好，看到你几个月前发的贴子，有问题想请教一下。我现在也想把纯化过的MBP融合蛋白进行Xa因子蛋白酶酶切，请问一下你是放在4度切的吗？酶切完在过柱子之前先跑个胶？切完怎么把蛋白酶给除去啊？  我最关心的是最后一个问题
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-10 14:03:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)
引用回帖:
1783459楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-06-30 13:58:06:
专一的酶不一定专一的，专一性是有条件的。另外污染微生物会产生蛋白酶导致降解的。

请问专一性的条件指的是哪些
赞一下 回复此楼
8楼2012-04-25 15:35:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vcitor宇8

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-03-10 14:03:28
你好，看到你几个月前发的贴子，有问题想请教一下。我现在也想把纯化过的MBP融合蛋白进行Xa因子蛋白酶酶切，请问一下你是放在4度切的吗？酶切完在过柱子之前先跑个胶？切完怎么把蛋白酶给除去啊？  我最关心的是最后 ...

你好，不知道你现在问题解决了吗？我目前也在做这个，酶切过后怎么把酶除去呢？谢谢
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-08 13:38:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 101202139 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭