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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白降解的问题
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101202139

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白降解的问题

最近表达融合蛋白，然后将融合标签用酶切除，可是不知为什么酶切产物之一目的蛋白在跑SDS-PAGE后发现条带较弱，按道理的话，酶切一定量的融合蛋白，应该产生相同质量的融合标签和目的蛋白，再体积一致的情况下，浓度应该也是差不多的。我尝试将储存在零下20度一段时间的酶切产物重新跑SDS-PAGE，发现目的蛋白更弱了。不知为什么？望各位虫友不吝指教！
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1楼 2011-06-30 09:37:44
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101202139

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-30 13:58:06:
专一的酶不一定专一的，专一性是有条件的。另外污染微生物会产生蛋白酶导致降解的。

TEV蛋白酶的专一性是有目共睹的，我的酶切缓冲液是经过高压灭菌的！
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6楼2011-06-30 21:42:58
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shuifen1108

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 2011-06-30 18:49:23
101202139(金币+2): 2011-06-30 21:37:37
切除融合标签所用的酶如Xa因子、凝血酶、肠激酶、凝乳酶、胶原酶。这些酶可能会使目的蛋白其他部位发生断裂，或者是你在酶切后纯化目的蛋白的过程中出问题了
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2楼2011-06-30 13:28:01
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 2011-06-30 18:49:30
专一的酶不一定专一的，专一性是有条件的。另外污染微生物会产生蛋白酶导致降解的。
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3楼2011-06-30 13:58:06
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 2011-06-30 18:49:36
蛋白在-20时降解还是挺厉害的，以前我也存-20后来存-80了
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4楼2011-06-30 17:42:10
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