应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的基因连T载体能连上，双酶切后连不上HTB质粒，都三个月了，纠结啊。。。
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
221/3返回列表123下一页
查看: 2354  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

blueghost2

新虫 (小有名气)

[求助] 目的基因连T载体能连上，双酶切后连不上HTB质粒，都三个月了，纠结啊。。。

我的目的基因1450左右，HTB质粒4856bp，双酶切的酶sal Ⅰ,xho Ⅰ,
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-10 14:39:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hanyuem

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
blueghost2: 金币+5, ★有帮助 2013-07-17 13:15:32
gyesang: 金币+2, 很有道理，载体都自连了！ 2013-07-17 14:34:47
SalI与XhoI是同尾酶，两个酶酶切后得到的粘性末端是一样的！！！所以这可能是你连不上的主要原因
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2013-07-17 11:26:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你买个试剂盒做一下
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-10 19:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimeifang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 分析的很好！ 2013-07-11 01:08:26
blueghost2: 金币+2, ★有帮助 2013-07-17 13:15:54
1.可能是目的基因片段太长了，导致连不上，可查阅此目的基因的相关资料，证实一下看是不是这个原因
2.可能是HTB质粒与目的基因不合适,可查阅HTB质粒的适用条件，再考虑要不要换连接质粒
3.可能是双酶切的酶有问题，可能是双酶切的两个酶切位点隔得很近，导致制切了一个位点，另一个没切成功，导致连不上；也可能是双酶切的缓冲液有问题，看它们所用缓冲液是否都适合两种酶酶切。
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-10 20:25:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励帮楼主分析问题！ 2013-07-11 01:08:42
blueghost2: 金币+2 2013-07-17 13:16:08
我觉得你的原因如下：
1、试剂盒有问题
2、你的连接体系有问题，你的比例是多大的，建议你换比例来连接，如1：8，1：10等
3、你的目的基因的条带亮度如何，够亮吗，你的载体条带亮度如何呢，最好要很亮
4、你酶切对了吗？如果对了的话，你就调整连接比例
建议你用TAKARA的连接试剂
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-10 23:07:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jeneffer0601

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感觉是你的载体没有处理好，双酶切后应该做个自连，确定载体酶切干净后一般做连接都是没有问题的！
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-15 16:06:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
努力，我也是构建载体，现在的问题是切不开，你比我强
赞一下 回复此楼
Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
6楼2013-07-17 10:30:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hanyuem at 2013-07-17 11:26:52
SalI与XhoI是同尾酶，两个酶酶切后得到的粘性末端是一样的！！！所以这可能是你连不上的主要原因

粘性末端一样就连不上吗？请您解释一下
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-17 12:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaohaixie at 2013-07-17 10:30:09
努力，我也是构建载体，现在的问题是切不开，你比我强

9楼2013-07-17 12:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yimeifang at 2013-07-10 20:25:34
1.可能是目的基因片段太长了，导致连不上，可查阅此目的基因的相关资料，证实一下看是不是这个原因
2.可能是HTB质粒与目的基因不合适,可查阅HTB质粒的适用条件，再考虑要不要换连接质粒
3.可能是双酶切的酶有问题 ...

目的片段不长，我们实验室目的片段3000左右都连上了。两酶切位点很远，两种酶的缓冲液都是Hbuffer
赞一下 回复此楼
10楼2013-07-17 12:58:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 blueghost2 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +8 张zic 2026-04-05 9/450 2026-04-06 13:03 by 猪会飞
[考研] 求调剂！生物与医药专硕 +5 逆转陆先生 2026-04-01 6/300 2026-04-06 12:49 by lys0704
[考研] 求调剂求调剂 +8 121. 2026-04-02 8/400 2026-04-05 20:15 by lys0704
[考研] 求调剂 +10 Hll胡 2026-04-04 10/500 2026-04-05 20:09 by nepu_uu
[考研] 22408 总分320，一篇论文二作，两个国三，求调剂 +3 Leomulufu 2026-04-04 5/250 2026-04-05 19:04 by chongya
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 求调剂 +3 ffyyu 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:03 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +9 hanamiko 2026-03-30 9/450 2026-04-04 11:04 by 猪会飞
[考研] 本9一志愿2 0854低分专硕286求调剂 +9 芒种111 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:01 by tangruihua
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 求调剂不挑专业 +3 xrh030412 2026-04-01 3/150 2026-04-03 14:40 by 氮气气气
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +9 哇呼哼呼哼 2026-04-02 9/450 2026-04-03 12:05 by 1753564080
[考研] 330求调剂 +3 白神呜呼呼 2026-04-02 3/150 2026-04-03 10:15 by 蓝云思雨
[考研] 土木304求调剂 +4 兔突突突， 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:16 by 兔突突突，
[考研] 318求调剂 +3 笃行致远. 2026-03-31 4/200 2026-04-02 15:56 by Jaylen.
[考博] 材料工程专业硕士申博 +3 麟正宇 2026-03-30 3/150 2026-04-02 15:04 by greychen00
[考研] 314求调剂 +11 1xiaojun23 2026-03-31 12/600 2026-04-02 12:31 by 1xiaojun23
[考研] 一志愿厦门大学化学工程（专硕）-数二英二406分-求调剂 +5 厦大化工 2026-04-01 5/250 2026-04-02 10:03 by jp9609
[考研] 土木304求调剂 +6 兔突突突， 2026-03-31 7/350 2026-04-02 09:06 by coolminer
[考研] 284求调剂 +12 小熊～～ 2026-03-31 12/600 2026-04-01 20:23 by 花??
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭