应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的基因连T载体能连上，双酶切后连不上HTB质粒，都三个月了，纠结啊。。。
221/3返回列表123下一页
查看: 2148  |  回复: 21
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

blueghost2

新虫 (小有名气)

[求助] 目的基因连T载体能连上，双酶切后连不上HTB质粒，都三个月了，纠结啊。。。

我的目的基因1450左右，HTB质粒4856bp，双酶切的酶sal Ⅰ,xho Ⅰ,
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-07-10 14:39:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hanyuem

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
blueghost2: 金币+5, ★有帮助 2013-07-17 13:15:32
gyesang: 金币+2, 很有道理，载体都自连了！ 2013-07-17 14:34:47
SalI与XhoI是同尾酶，两个酶酶切后得到的粘性末端是一样的！！！所以这可能是你连不上的主要原因
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2013-07-17 11:26:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你买个试剂盒做一下
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-10 19:19:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimeifang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 分析的很好！ 2013-07-11 01:08:26
blueghost2: 金币+2, ★有帮助 2013-07-17 13:15:54
1.可能是目的基因片段太长了，导致连不上，可查阅此目的基因的相关资料，证实一下看是不是这个原因
2.可能是HTB质粒与目的基因不合适,可查阅HTB质粒的适用条件，再考虑要不要换连接质粒
3.可能是双酶切的酶有问题，可能是双酶切的两个酶切位点隔得很近，导致制切了一个位点，另一个没切成功，导致连不上；也可能是双酶切的缓冲液有问题，看它们所用缓冲液是否都适合两种酶酶切。
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-10 20:25:34
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励帮楼主分析问题！ 2013-07-11 01:08:42
blueghost2: 金币+2 2013-07-17 13:16:08
我觉得你的原因如下：
1、试剂盒有问题
2、你的连接体系有问题，你的比例是多大的，建议你换比例来连接，如1：8，1：10等
3、你的目的基因的条带亮度如何，够亮吗，你的载体条带亮度如何呢，最好要很亮
4、你酶切对了吗？如果对了的话，你就调整连接比例
建议你用TAKARA的连接试剂
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-10 23:07:26
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jeneffer0601

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感觉是你的载体没有处理好，双酶切后应该做个自连，确定载体酶切干净后一般做连接都是没有问题的！
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-15 16:06:11
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
努力，我也是构建载体，现在的问题是切不开，你比我强
赞一下 回复此楼
Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
6楼2013-07-17 10:30:09
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hanyuem at 2013-07-17 11:26:52
SalI与XhoI是同尾酶，两个酶酶切后得到的粘性末端是一样的！！！所以这可能是你连不上的主要原因

粘性末端一样就连不上吗？请您解释一下
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-17 12:55:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaohaixie at 2013-07-17 10:30:09
努力，我也是构建载体，现在的问题是切不开，你比我强

9楼2013-07-17 12:55:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yimeifang at 2013-07-10 20:25:34
1.可能是目的基因片段太长了，导致连不上，可查阅此目的基因的相关资料，证实一下看是不是这个原因
2.可能是HTB质粒与目的基因不合适,可查阅HTB质粒的适用条件，再考虑要不要换连接质粒
3.可能是双酶切的酶有问题 ...

目的片段不长，我们实验室目的片段3000左右都连上了。两酶切位点很远，两种酶的缓冲液都是Hbuffer
赞一下 回复此楼
10楼2013-07-17 12:58:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 blueghost2 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭