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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zz418841988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-21 08:14:56
hanyuem 说的对,你选的两个酶是同尾酶,同尾酶双酶切后做连接,载体就会自连成环,你的酶切后的载体自连的话应该会长满板的克隆,片段插入进去的概率就很小了,也就是说你的片段基本上就连不进去。如果你一定要用这两个酶的话,在载体双酶切后要去磷酸化处理,片段不用处理,再做连接,而且这样片段连进去后,还需要鉴定片段连接的方向。
21楼2013-07-18 16:32:57
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by hanyuem at 2013-07-17 17:11:17
我想问一下,你是怎么验证是否连接上的?...

连完以后菌液PCR、单双酶切验证、测序,我是这么做的
Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
22楼2013-07-18 18:26:19
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