应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的基因连T载体能连上，双酶切后连不上HTB质粒，都三个月了，纠结啊。。。
221/3返回列表123下一页
查看: 2662  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

blueghost2

新虫 (小有名气)

[求助] 目的基因连T载体能连上，双酶切后连不上HTB质粒，都三个月了，纠结啊。。。

我的目的基因1450左右，HTB质粒4856bp，双酶切的酶sal Ⅰ,xho Ⅰ,
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-10 14:39:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hanyuem

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
blueghost2: 金币+5, ★有帮助 2013-07-17 13:15:32
gyesang: 金币+2, 很有道理，载体都自连了！ 2013-07-17 14:34:47
SalI与XhoI是同尾酶，两个酶酶切后得到的粘性末端是一样的！！！所以这可能是你连不上的主要原因
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2013-07-17 11:26:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你买个试剂盒做一下
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-10 19:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimeifang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 分析的很好！ 2013-07-11 01:08:26
blueghost2: 金币+2, ★有帮助 2013-07-17 13:15:54
1.可能是目的基因片段太长了，导致连不上，可查阅此目的基因的相关资料，证实一下看是不是这个原因
2.可能是HTB质粒与目的基因不合适,可查阅HTB质粒的适用条件，再考虑要不要换连接质粒
3.可能是双酶切的酶有问题，可能是双酶切的两个酶切位点隔得很近，导致制切了一个位点，另一个没切成功，导致连不上；也可能是双酶切的缓冲液有问题，看它们所用缓冲液是否都适合两种酶酶切。
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-10 20:25:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励帮楼主分析问题！ 2013-07-11 01:08:42
blueghost2: 金币+2 2013-07-17 13:16:08
我觉得你的原因如下：
1、试剂盒有问题
2、你的连接体系有问题，你的比例是多大的，建议你换比例来连接，如1：8，1：10等
3、你的目的基因的条带亮度如何，够亮吗，你的载体条带亮度如何呢，最好要很亮
4、你酶切对了吗？如果对了的话，你就调整连接比例
建议你用TAKARA的连接试剂
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-10 23:07:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jeneffer0601

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感觉是你的载体没有处理好，双酶切后应该做个自连，确定载体酶切干净后一般做连接都是没有问题的！
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-15 16:06:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
努力，我也是构建载体，现在的问题是切不开，你比我强
赞一下 回复此楼
Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
6楼2013-07-17 10:30:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hanyuem at 2013-07-17 11:26:52
SalI与XhoI是同尾酶，两个酶酶切后得到的粘性末端是一样的！！！所以这可能是你连不上的主要原因

粘性末端一样就连不上吗？请您解释一下
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-17 12:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaohaixie at 2013-07-17 10:30:09
努力，我也是构建载体，现在的问题是切不开，你比我强

9楼2013-07-17 12:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yimeifang at 2013-07-10 20:25:34
1.可能是目的基因片段太长了，导致连不上，可查阅此目的基因的相关资料，证实一下看是不是这个原因
2.可能是HTB质粒与目的基因不合适,可查阅HTB质粒的适用条件，再考虑要不要换连接质粒
3.可能是双酶切的酶有问题 ...

目的片段不长，我们实验室目的片段3000左右都连上了。两酶切位点很远，两种酶的缓冲液都是Hbuffer
赞一下 回复此楼
10楼2013-07-17 12:58:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 blueghost2 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭