应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的基因与载体连接问题
91/1返回列表
查看: 3260  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zr1140861173

铁虫 (小有名气)

[求助] 目的基因与载体连接问题

我PCR的目的基因4600bp，想直接去连接载体pPIC3.5k（大概9000bp），按照正常的连接过程一直都连接不上，各位有谁做过类似的实验吗，求帮助啊！！！！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验交流

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
这是我自己选择的道路，我不需要怜悯，亦没必要动摇，生也是我，死也是我，胜固欣然，败也从容
1楼 2013-11-28 14:49:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dnacomputer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-28 14:57:24
载体太大了，换个小载体试试。克隆成功以后再转到这个大载体中

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-11-28 14:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuht1983

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励新虫发帖交流，欢迎常来！ 2013-11-28 18:03:34
本帖内容被屏蔽
3楼2013-11-28 16:57:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoyanfei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-29 14:14:06
PCR片段有点大，你试着把链接体系中的目的片段量降低，降到跟载体差不多或者稍微比载体量多一些，延长链接时间；另外要确保载体和片段酶切充分，并且酶切位点正确，不要有星活性出现；
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2013-11-29 08:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anning529

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2013-11-29 14:21:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按正常程序连的话，应该也是没有问题的，不知道你一直都连接不上，走的是什么过程
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-11-29 14:41:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dang_qi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两个太大的确不太好连，我之前做过4K+5K
建议质粒进行两次单酶切，时间可以长一点
还有就是坚持，太大了没办法
赞一下(1人) 回复此楼
手指所触碰到的距离必有你所期待的风景.
7楼2013-11-30 17:13:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baowanrui110
8楼2013-11-30 17:31:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

recca1016

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不知道楼主的问题解决了没有，这个我经验比较多，楼主可以参考下
无论大小片段连接，最重要的就是片段浓度和纯度。
如果PCR片段的杂带不是太多，建议不要切胶，直接将pcr产物过纯化kit，酶切，再直接连接；载体也是一样，如果低拷贝的质粒浓度不高，可以过量酶切之后直接纯化，连接。
PCR片段可以适当加的比例高一些。

祝你好运。
赞一下(1人) 回复此楼
流水不腐，户枢不蠹
9楼2013-12-06 16:22:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zr1140861173 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +4 曦熙兮 2026-03-15 4/200 2026-03-15 18:01 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-15 3/150 2026-03-15 09:12 by JourneyLucky
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 求调剂，一志愿江南大学环境工程085701 +3 Djdjj12 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:31 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭