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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体为什么连不上呢
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

[求助] 载体为什么连不上呢

想问一下 我的表达载体与目的片段一直连不上是怎么回事啊 求救啊
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1楼 2013-06-18 09:33:02
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shanqian1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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kabuqinuo89(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-18 10:51:53
kabuqinuo89: 金币+1 2013-06-18 12:07:06
酶切位点正确吗，是不是载体没有酶切完全？
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2楼2013-06-18 10:19:08
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RUI1990

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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kabuqinuo89(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-18 10:52:01
kabuqinuo89: 金币+1 2013-06-19 11:00:30
看酶切位点是否正确，酶切是否充分，有时酶切不完全会影响胶回收DNA片段；也许是DNA连接酶出了问题。
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做自己
3楼2013-06-18 10:20:29
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myprayer

专家顾问 (著名写手)

优秀版主

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kabuqinuo89: 金币+1 2013-06-19 11:00:26
酶切位点相邻的确有可能降低切割效率
说明即使这两个位点相邻也能够切开。
而插入目的片段后两个位点已经不相邻了，切不下来可能是你的限制酶有问题。
你还可以试试换其他限制酶切
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4楼2013-06-18 10:53:56
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shanqian1988 at 2013-06-18 10:19:08
酶切位点正确吗，是不是载体没有酶切完全？

正确 就是不知道切开没 我是在目的片段的两端设计的酶切位点 所以根本没法检测 很郁闷
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5楼2013-06-18 12:07:43
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by myprayer at 2013-06-18 10:53:56
酶切位点相邻的确有可能降低切割效率
说明即使这两个位点相邻也能够切开。
而插入目的片段后两个位点已经不相邻了，切不下来可能是你的限制酶有问题。
你还可以试试换其他限制酶切

酶应该没有问题 可以切开TA克隆的
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6楼2013-06-18 12:08:46
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ghf098

新虫 (初入文坛)
是先做TA克隆，然后再切下来目的片段，再连接到载体的吗？
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7楼2013-06-21 08:35:40
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