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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

[求助] 载体为什么连不上呢

想问一下 我的表达载体与目的片段一直连不上是怎么回事啊 求救啊
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shanqian1988

铜虫 (小有名气)

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kabuqinuo89(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-18 10:51:53
kabuqinuo89: 金币+1 2013-06-18 12:07:06
酶切位点正确吗,是不是载体没有酶切完全?
2楼2013-06-18 10:19:08
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RUI1990

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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kabuqinuo89(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-18 10:52:01
kabuqinuo89: 金币+1 2013-06-19 11:00:30
看酶切位点是否正确,酶切是否充分,有时酶切不完全会影响胶回收DNA片段;也许是DNA连接酶出了问题。
做自己
3楼2013-06-18 10:20:29
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myprayer

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【答案】应助回帖


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kabuqinuo89: 金币+1 2013-06-19 11:00:26
酶切位点相邻的确有可能降低切割效率
说明即使这两个位点相邻也能够切开。
而插入目的片段后两个位点已经不相邻了,切不下来可能是你的限制酶有问题。
你还可以试试换其他限制酶切
4楼2013-06-18 10:53:56
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shanqian1988 at 2013-06-18 10:19:08
酶切位点正确吗,是不是载体没有酶切完全?

正确 就是不知道切开没 我是在目的片段的两端设计的酶切位点 所以根本没法检测 很郁闷
5楼2013-06-18 12:07:43
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by myprayer at 2013-06-18 10:53:56
酶切位点相邻的确有可能降低切割效率
说明即使这两个位点相邻也能够切开。
而插入目的片段后两个位点已经不相邻了,切不下来可能是你的限制酶有问题。
你还可以试试换其他限制酶切

酶应该没有问题 可以切开TA克隆的
6楼2013-06-18 12:08:46
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ghf098

新虫 (初入文坛)

是先做TA克隆,然后再切下来目的片段,再连接到载体的吗?
7楼2013-06-21 08:35:40
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