24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2512  |  回复: 8

水晶无影

新虫 (初入文坛)

[求助] 2174bp大小的分子片段和PMD18T都连不上,各位帮忙想想办法哦

本人在做枯草芽孢杆菌中的表达,目的基因大小为2174bp,为什么和T载体都连不上呢?各位帮忙分析下原因,非常感谢哦,都做半年了,一直没结果
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-06 13:46:24
不知道你用的是什么T载体 如果是PMD19 T 那就不好连 因为载体大小和目的片段大小差不多 那就换个大的载体 如果不是这个载体那即是你目的基因浓度低了
2楼2012-07-05 13:53:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水晶无影

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by syn1985 at 2012-07-05 13:53:55
不知道你用的是什么T载体 如果是PMD19 T 那就不好连 因为载体大小和目的片段大小差不多 那就换个大的载体 如果不是这个载体那即是你目的基因浓度低了

我用的是PMD18T,浓度还蛮大的,跑电泳颜色蛮深的。这个与引物有关系吗,因为我的引物不是自己设计的,是师姐帮忙设计的
,谢谢哦
3楼2012-07-05 14:54:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maychao123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-06 13:46:35
引用回帖:
3楼: Originally posted by 水晶无影 at 2012-07-05 14:54:59
我用的是PMD18T,浓度还蛮大的,跑电泳颜色蛮深的。这个与引物有关系吗,因为我的引物不是自己设计的,是师姐帮忙设计的
,谢谢哦...

跟引物没关系,只要PCR产物的大小正确就行,可能有关系的是你用的什么连接酶、连接体系、目的片段浓度,还有,是化转以后没有阳性重组子?还是以连接体系为模版去PCR就没有正切大小的条带呢?
Don‘tforget3Oct
4楼2012-07-05 15:26:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-06 13:46:43
我的目的片段1926,连的pMD-19T,貌似连接也出问题了……
之前1790的片段很顺利的每次都能跟pMD19-T连接上.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2012-07-05 15:30:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

758836596

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-06 13:46:53
可能跟你PCR用的MIX有关系,有些mix的PCR产物直接就连上了,有些就不行,我们用的达科为的一种长链mix,连接1h就得到很多阳性菌落,祝你实验顺利。
6楼2012-07-05 16:17:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaikal

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我想问下你是用什么酶扩增的,如果用KOD这种高保真酶扩你需要加A尾的!如果不是的话,我建议自己重新设计一对引物吧!
加油!!!
7楼2012-07-06 09:31:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 水晶无影 at 2012-07-05 14:54:59
我用的是PMD18T,浓度还蛮大的,跑电泳颜色蛮深的。这个与引物有关系吗,因为我的引物不是自己设计的,是师姐帮忙设计的
,谢谢哦...

换个大的T载体连接吧 换个就应该能连上了
8楼2012-07-06 11:55:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换个大点的T载体吧。另外不同的聚合酶可能涉及到是否还需要加A尾
9楼2012-07-07 14:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 水晶无影 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[教师之家] 请问地理、遥感方面,可以做哪些横向项目啊,纵向完不成考核啊 +3 锦衣卫寒战 2026-04-07 5/250 2026-04-11 20:51 by 豫椒
[考研] 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-06 8/400 2026-04-11 20:25 by 蓝云思雨
[考研] 085404 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-08 8/400 2026-04-11 12:08 by zhq0425
[考研] 计算机11408,286分求调剂 +10 木子念晞 2026-04-05 10/500 2026-04-11 10:44 by zhq0425
[考研] 283求调剂,工科! +12 苏打水7777 2026-04-08 12/600 2026-04-11 10:28 by 逆水乘风
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 材料专业344求调剂 +16 hualkop 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 17:28 by laoshidan
[考研] 314求调剂 +23 wakeluofu 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 15:31 by MOF_Catal
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 277求调剂 +19 倪建设 2026-04-06 19/950 2026-04-10 09:24 by guosr9609
[考研] 考研调剂 +13 冰冰,,, 2026-04-07 13/650 2026-04-09 17:01 by Lilly_Li
[考研] 334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 09:28 by wdyheheeh
[考研] 一志愿985初试354分生物调剂 +3 031001 2026-04-06 3/150 2026-04-09 00:30 by Evan_Liu
[考研] 270求调剂 +3 031127 2026-04-06 4/200 2026-04-08 21:00 by 逆水乘风
[考研] 266调剂 +8 daya sun 2026-04-07 9/450 2026-04-08 20:27 by yutian743
[考研] 304求调剂 +16 c297914 2026-04-05 17/850 2026-04-08 13:00 by grayjzr
[考研] 调剂求助(生物与医药) +6 @6952 2026-04-06 6/300 2026-04-07 23:52 by lys0704
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] 277求调剂 数一104分 +9 瓶子PZ 2026-04-05 14/700 2026-04-07 17:52 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见