应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 2174bp大小的分子片段和PMD18T都连不上，各位帮忙想想办法哦
91/1返回列表
查看: 2477  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

水晶无影

新虫 (初入文坛)

[求助] 2174bp大小的分子片段和PMD18T都连不上，各位帮忙想想办法哦

本人在做枯草芽孢杆菌中的表达，目的基因大小为2174bp，为什么和T载体都连不上呢？各位帮忙分析下原因，非常感谢哦，都做半年了，一直没结果
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-05 11:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-06 13:46:24
不知道你用的是什么T载体 如果是PMD19 T 那就不好连 因为载体大小和目的片段大小差不多 那就换个大的载体 如果不是这个载体那即是你目的基因浓度低了
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-05 13:53:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水晶无影

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by syn1985 at 2012-07-05 13:53:55
不知道你用的是什么T载体 如果是PMD19 T 那就不好连 因为载体大小和目的片段大小差不多 那就换个大的载体 如果不是这个载体那即是你目的基因浓度低了

我用的是PMD18T，浓度还蛮大的，跑电泳颜色蛮深的。这个与引物有关系吗，因为我的引物不是自己设计的，是师姐帮忙设计的
，谢谢哦
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-05 14:54:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maychao123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-06 13:46:35
引用回帖:
3楼: Originally posted by 水晶无影 at 2012-07-05 14:54:59
我用的是PMD18T，浓度还蛮大的，跑电泳颜色蛮深的。这个与引物有关系吗，因为我的引物不是自己设计的，是师姐帮忙设计的
，谢谢哦...

跟引物没关系，只要PCR产物的大小正确就行，可能有关系的是你用的什么连接酶、连接体系、目的片段浓度，还有，是化转以后没有阳性重组子？还是以连接体系为模版去PCR就没有正切大小的条带呢？
赞一下 回复此楼
Don‘tforget3Oct
4楼2012-07-05 15:26:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-06 13:46:43
我的目的片段1926，连的pMD-19T，貌似连接也出问题了……
之前1790的片段很顺利的每次都能跟pMD19-T连接上.
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2012-07-05 15:30:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

758836596

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-06 13:46:53
可能跟你PCR用的MIX有关系，有些mix的PCR产物直接就连上了，有些就不行，我们用的达科为的一种长链mix，连接1h就得到很多阳性菌落，祝你实验顺利。
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-05 16:17:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaikal

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我想问下你是用什么酶扩增的，如果用KOD这种高保真酶扩你需要加A尾的！如果不是的话，我建议自己重新设计一对引物吧！
赞一下 回复此楼
加油！！！
7楼2012-07-06 09:31:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 水晶无影 at 2012-07-05 14:54:59
我用的是PMD18T，浓度还蛮大的，跑电泳颜色蛮深的。这个与引物有关系吗，因为我的引物不是自己设计的，是师姐帮忙设计的
，谢谢哦...

换个大的T载体连接吧 换个就应该能连上了
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-06 11:55:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个大点的T载体吧。另外不同的聚合酶可能涉及到是否还需要加A尾
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-07 14:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 水晶无影 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭