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zr1140861173

铁虫 (小有名气)

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[求助] 目的基因与载体连接问题

我PCR的目的基因4600bp，想直接去连接载体pPIC3.5k（大概9000bp），按照正常的连接过程一直都连接不上，各位有谁做过类似的实验吗，求帮助啊！！！！！！

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这是我自己选择的道路，我不需要怜悯，亦没必要动摇，生也是我，死也是我，胜固欣然，败也从容

1楼 2013-11-28 14:49:26

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recca1016

铁虫 (初入文坛)

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专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

不知道楼主的问题解决了没有，这个我经验比较多，楼主可以参考下
无论大小片段连接，最重要的就是片段浓度和纯度。
如果PCR片段的杂带不是太多，建议不要切胶，直接将pcr产物过纯化kit，酶切，再直接连接；载体也是一样，如果低拷贝的质粒浓度不高，可以过量酶切之后直接纯化，连接。
PCR片段可以适当加的比例高一些。

祝你好运。