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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的基因构建载体方向问题概念有点不清楚，请教各位大侠
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sunbeartao

新虫 (小有名气)

[求助] 目的基因构建载体方向问题概念有点不清楚，请教各位大侠

目的片段构建质粒载体时，目的片段连接到多克隆酶切位点上，
1、基因片段的方向要和多克隆酶切位点的转录方向一样，这里目的片段的方向怎么理解，有ATG的就是上游，然后上游往下游转录？
2、多克隆位点有T7启动子，转录的起始识别启动子后就开始了，启动开始后后面的序列就开始转录了，那启动子后面的基因序列就不需要所谓的方向了，都会根据序列被转录合成肽连，翻译时识别起始密码子AUG就能确定翻译方向了？
请各位大侠指点，小弟新手，不胜感激！
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22
1楼 2013-01-01 22:29:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-02 11:47:12
sunbeartao: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-01-03 13:40:46
感觉LZ不是学生物的吧，这些问题都是很基本的，稍微看一下书就可以明白。
所谓方向就是你克隆的DNA片段上的基因是有方向性的，从ATG起始到TAA结束的。所谓启动子是指RNA聚合酶结合的地方，RNA聚合酶识别启动子下游附近的ATG，以其互补链为模板转录出mRNA。mRNA是单链且有方向的，除去上游的非翻译区，核糖体是以mRNA上的AUG为起始从5'开始翻译的。所以说，你的目的基因插入在启动子下游的CMS处的时候，必需是从ATG到TAA方向的。反过来插入的话，你的序列就不是原来的ATG到TAA了。也就得不到正确的mRNA序列了。
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2楼2013-01-02 02:37:13
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lxbxk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同意楼上的额，楼主看看分子生物学这本书就行了，都是些基本概念方面的问题，或者直接百度一下就知道了，呵呵
赞一下 回复此楼
做开心的自己，加油
3楼2013-01-02 11:22:14
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jxylm2001

至尊木虫 (著名写手)
看看高手们的回答！
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IAMAP
4楼2013-01-02 12:17:01
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sunbeartao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-02 02:37:13
感觉LZ不是学生物的吧，这些问题都是很基本的，稍微看一下书就可以明白。
所谓方向就是你克隆的DNA片段上的基因是有方向性的，从ATG起始到TAA结束的。所谓启动子是指RNA聚合酶结合的地方，RNA聚合酶识别启动子下游 ...

我也查了权威资料了，资料上说RNA聚合酶是从转录起点开始转录，转录起点后的称为下游，以上为上游，貌似不是从ATG开始转录的，那么就可以转录 出后面的序列？忘希望大侠指教
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22
5楼2013-01-03 13:39:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by sunbeartao at 2013-01-03 13:39:39
我也查了权威资料了，资料上说RNA聚合酶是从转录起点开始转录，转录起点后的称为下游，以上为上游，貌似不是从ATG开始转录的，那么就可以转录 出后面的序列？忘希望大侠指教...

你的理解有问题。不能断章取义吧。转录的时候在基因的5'和3'分别有非翻译区，这个我前面也提到了。RNA聚合酶是识别基因的启动子序列。原核生物主要是ATG前-10区和-35区。启动子只是负责被RNA聚合酶所识别，然后RNA聚合酶在DNA链上滑动，寻找下游的转录起始密码子（ATG）。和DNA复制不同，转录只能是单链的，只有和启动子方向一致的那条链上的序列可以被转录。如果ATG离启动子距离远的话，不能保障有效的转录起始。如果没有起始密码，无法形成pre-mRNA。所以不是什么序列都可以被转录的。否则生命体得浪费多少能量和资源在这上面啊。
而且你的问题和这个根本没有关系。如果基因序列是反向插入的，序列不对，不能形成正确的产物。
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6楼2013-01-03 14:21:04
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