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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zr1140861173

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 目的基因与载体连接问题

我PCR的目的基因4600bp,想直接去连接载体pPIC3.5k(大概9000bp),按照正常的连接过程一直都连接不上,各位有谁做过类似的实验吗,求帮助啊!!!!!!
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这是我自己选择的道路,我不需要怜悯,亦没必要动摇,生也是我,死也是我,胜固欣然,败也从容
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gyesang

无虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
按正常程序连的话,应该也是没有问题的,不知道你一直都连接不上,走的是什么过程
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-11-29 14:41:11
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查看全部 9 个回答

dnacomputer

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-28 14:57:24
载体太大了,换个小载体试试。克隆成功以后再转到这个大载体中

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2013-11-28 14:56:14
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zhuht1983

兑换贵宾

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励新虫发帖交流,欢迎常来! 2013-11-28 18:03:34
本帖内容被屏蔽

3楼2013-11-28 16:57:20
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guoyanfei

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-29 14:14:06
PCR片段有点大,你试着把链接体系中的目的片段量降低,降到跟载体差不多或者稍微比载体量多一些,延长链接时间;另外要确保载体和片段酶切充分,并且酶切位点正确,不要有星活性出现;
4楼2013-11-29 08:41:51
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