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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因克隆过程中质粒、感受态细胞对氨苄的抗性
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mangmanglulu

金虫 (小有名气)

[交流] 基因克隆过程中质粒、感受态细胞对氨苄的抗性 已有4人参与

基因克隆过程中质粒、感受态细胞对氨苄的抗性如何？
假如质粒没有转入到感受态中，在添加AMP的板子上有没有菌落呢？
主要是想询问连接转化过程中，那个因素在决定着对AMP的抗性呢？是质粒有抗性基因还是感受态细胞有呢？
请大家指教........
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1楼 2013-03-15 11:01:14
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
一般是质粒！！！！！！
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2楼2013-03-15 11:20:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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抗性基因当然是在质粒或者构建的载体上的，如果感受态有抗性，还称得上是筛选平板吗？当然，有些工程感受态细胞对一些特定基因做了突变，菌体本身是携带抗性基因的，使用时对携带相同抗性的载体要注意。
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3楼2013-03-15 11:26:04
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mangmanglulu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-15 11:26:04
抗性基因当然是在质粒或者构建的载体上的，如果感受态有抗性，还称得上是筛选平板吗？当然，有些工程感受态细胞对一些特定基因做了突变，菌体本身是携带抗性基因的，使用时对携带相同抗性的载体要注意。

如果说质粒没有转进去，板子是不是就不会长出菌落呢？
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4楼2013-03-15 12:13:14
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mangmanglulu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiaoxiayoulu at 2013-03-15 11:20:11
一般是质粒！！！！！！

如果板子上长出来菌落了 是不是就证明质粒转进去了呢？
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5楼2013-03-15 12:13:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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4楼: Originally posted by mangmanglulu at 2013-03-15 12:13:14
如果说质粒没有转进去，板子是不是就不会长出菌落呢？...

是的。如果长了说明抗性板筛选压力不足或者是操作感受态细胞过程中污染了。
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6楼2013-03-16 00:29:41
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yixinyuan

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-15 11:26:04
抗性基因当然是在质粒或者构建的载体上的，如果感受态有抗性，还称得上是筛选平板吗？当然，有些工程感受态细胞对一些特定基因做了突变，菌体本身是携带抗性基因的，使用时对携带相同抗性的载体要注意。

一般来说，用氨苄筛选阳性克隆时，没有转化成功一般氨苄平板是不会有菌落的，除非有污染或者氨苄失效
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7楼2013-03-16 11:09:00
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yixinyuan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-15 11:26:04
抗性基因当然是在质粒或者构建的载体上的，如果感受态有抗性，还称得上是筛选平板吗？当然，有些工程感受态细胞对一些特定基因做了突变，菌体本身是携带抗性基因的，使用时对携带相同抗性的载体要注意。

一般来说，用氨苄筛选阳性克隆时，没有转化成功一般氨苄平板是不会有菌落的，除非有污染或者氨苄失效
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8楼2013-03-16 11:12:15
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mangmanglulu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yixinyuan at 2013-03-16 11:12:15
一般来说，用氨苄筛选阳性克隆时，没有转化成功一般氨苄平板是不会有菌落的，除非有污染或者氨苄失效...

谢谢诸位帮忙！
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9楼2013-03-19 09:41:13
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qqxs

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒上的抗性基因决定了转化子具有什么样的抗性，选择的抗生素一定是感受态细胞敏感的，否则无法作为筛选标记。即，未转入质粒不生长。你应该自己查看所有质粒的图谱和感受态菌种的性状。
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10楼2013-03-19 11:11:02
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