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关于基因重组过程中的去磷酸化和连接
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在基因重组过程中，质粒载体单酶切后进行去磷酸化。目的片段通过PCR获得后，也进行酶切。这样获得的酶切质粒和目的基因片段可以直接连接，然后导入大肠杆菌的感受态细胞吗？还是要把目的基因片段进行磷酸化后才能进行连接、导入。 （质粒为了防止发生自连进行了去磷酸化，这样就失去了磷酸键，还可以可目的基因片段连吗？还是必须给目的基因片段磷酸化，加上一个磷酸键，才能进行连接？）这块儿有点小蒙，求详解，先谢过！ |
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银虫 (著名写手)
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2楼2012-10-25 13:51:52
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yuliansheng: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢你的回复。能再问一个简单的问题吗？载体单酶切后需要去磷酸化，为什么目的片段单酶切后不用去磷酸化，在连接过程中不会发生自连，减低载体与目的片的连接效率吗？ 2012-10-26 14:02:25
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yuliansheng: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢你的回复。能再问一个简单的问题吗？载体单酶切后需要去磷酸化，为什么目的片段单酶切后不用去磷酸化，在连接过程中不会发生自连，减低载体与目的片的连接效率吗？ 2012-10-26 14:02:25
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3楼2012-10-25 17:01:57
4楼2012-10-25 17:20:30
5楼2014-04-17 18:53:10