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欲检测重组蛋白能否被磷酸化
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如题，我想重组个含有磷酸化位点的蛋白，然后检测下这个蛋白能否被磷酸化； 如果可以的话有没有什么方法能够确定一下蛋白的磷酸化位点. 请大家多多指教、探讨！ |
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mitocam
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-24 13:44:42
tianmaxk: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢！追问一下，一般用什么酶对磷酸化位点进行磷酸化？磷酸化位点只有一个能否检测出来？ 2012-08-24 14:36:10
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tianmaxk: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢！追问一下，一般用什么酶对磷酸化位点进行磷酸化？磷酸化位点只有一个能否检测出来？ 2012-08-24 14:36:10
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试用一下PhosTag SDSPAGE，如果运气好，磷酸化的蛋白质和未磷酸化的（用碱性磷酸化酶处理一下）同时跑胶，看看是否有明显差异。我检测过单个磷酸化位点的蛋白质，分离的很好，很容易就区别出来了。也有蛋白质无法分离的。 测定磷酸化位点，如果有条件可以用质谱分析，分离到磷酸化肽测序。如果上述PhosTag方法可行，突变最可能的磷酸化位点，检验是否点突变消除了磷酸化，这是一个苯方法。 |
2楼2012-08-24 04:43:19
mitocam
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