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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pMAL载体表达重组蛋白
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758836596

铜虫 (初入文坛)

[求助] pMAL载体表达重组蛋白

最近在做蛋白表达，载体选择的是pMAL，目的片段是自己设计的一段300多bp的片段，质粒构建成功之后蛋白就是表达不出来，宿主菌试了TB1和BL21，诱导温度试了37,30,16，IPTG也试了各种浓度，结果还是诱导不出来，请问有什么别的办法啊？谢谢各位了。
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1楼 2012-07-02 21:14:35
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回帖置顶 ( 共有1个 )

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 虫虫最近很活跃哦，谢谢对分子版的支持 2012-07-03 15:36:20
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 19:02:17
表达不出来的原因很多的，宿主菌跟诱导条件是一方面，另一方面要考虑你扩增的目的片段是否完整？有无表达先例，这个可以参照一些文献，还有你目标片段的稀有密码子是否检测过，如果连续出现稀有密码子，可能会造成翻译中断，这也会造成蛋白表达的失败，如果是这个情况就需要更换专门表达稀有密码子过多的宿主细胞.
建议楼主多从表达载体和目的片段的结构入手，祝楼主好运.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-02 21:48:45
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 758836596 at 2012-07-03 13:33:25
是有稀有密码子，但是连续出现时什么意思啊？中间隔几个密码子之后再出现的话算是连续吗？还有，专门表达稀有密码子过多的宿主细胞都有哪些啊？...

连续的AT或者GC
宿主细胞可以选择Rosetta系列的菌株
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
7楼2012-07-03 13:43:54
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普通回帖

阿娇阿娇
顶
3楼2012-07-03 10:46:02
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bayo

禁虫 (初入文坛)
小丹木木: 屏蔽内容, 广告屏蔽 2012-07-03 15:36:51
本帖内容被屏蔽
4楼2012-07-03 11:49:58
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758836596

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-07-03 10:46:02
顶

5楼2012-07-03 13:29:33
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758836596

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-02 21:48:45
表达不出来的原因很多的，宿主菌跟诱导条件是一方面，另一方面要考虑你扩增的目的片段是否完整？有无表达先例，这个可以参照一些文献，还有你目标片段的稀有密码子是否检测过，如果连续出现稀有密码子，可能会造成翻 ...

是有稀有密码子，但是连续出现时什么意思啊？中间隔几个密码子之后再出现的话算是连续吗？还有，专门表达稀有密码子过多的宿主细胞都有哪些啊？
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6楼2012-07-03 13:33:25
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758836596

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Marado at 2012-07-03 13:43:54
连续的AT或者GC
宿主细胞可以选择Rosetta系列的菌株...

谢谢啦，实在不行我就试试吧。
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8楼2012-07-03 17:24:48
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plumplumgxc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是构建载体时用的序列的问题，pMal应该不难做的。回头检查一下是不是有低级错误
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科研这条道不好走啊。。。
9楼2012-07-04 10:57:00
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758836596

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by plumplumgxc at 2012-07-04 10:57:00
应该是构建载体时用的序列的问题，pMal应该不难做的。回头检查一下是不是有低级错误

好的，谢谢啦，我回头仔细核对一下。
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10楼2012-07-04 19:09:46
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