24小时热门版块排行榜    

查看: 2402  |  回复: 14

758836596

铜虫 (初入文坛)

[求助] pMAL载体表达重组蛋白

最近在做蛋白表达,载体选择的是pMAL,目的片段是自己设计的一段300多bp的片段,质粒构建成功之后蛋白就是表达不出来,宿主菌试了TB1和BL21,诱导温度试了37,30,16,IPTG也试了各种浓度,结果还是诱导不出来,请问有什么别的办法啊?谢谢各位了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 虫虫最近很活跃哦,谢谢对分子版的支持 2012-07-03 15:36:20
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 19:02:17
表达不出来的原因很多的,宿主菌跟诱导条件是一方面,另一方面要考虑你扩增的目的片段是否完整?有无表达先例,这个可以参照一些文献,还有你目标片段的稀有密码子是否检测过,如果连续出现稀有密码子,可能会造成翻译中断,这也会造成蛋白表达的失败,如果是这个情况就需要更换专门表达稀有密码子过多的宿主细胞.
建议楼主多从表达载体和目的片段的结构入手,祝楼主好运.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-02 21:48:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 758836596 at 2012-07-03 13:33:25
是有稀有密码子,但是连续出现时什么意思啊?中间隔几个密码子之后再出现的话算是连续吗?还有,专门表达稀有密码子过多的宿主细胞都有哪些啊?...

连续的AT或者GC
宿主细胞可以选择Rosetta系列的菌株
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
7楼2012-07-03 13:43:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖
3楼2012-07-03 10:46:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bayo

禁虫 (初入文坛)

小丹木木: 屏蔽内容, 广告屏蔽 2012-07-03 15:36:51
本帖内容被屏蔽

4楼2012-07-03 11:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

758836596

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-07-03 10:46:02

5楼2012-07-03 13:29:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

758836596

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-02 21:48:45
表达不出来的原因很多的,宿主菌跟诱导条件是一方面,另一方面要考虑你扩增的目的片段是否完整?有无表达先例,这个可以参照一些文献,还有你目标片段的稀有密码子是否检测过,如果连续出现稀有密码子,可能会造成翻 ...

是有稀有密码子,但是连续出现时什么意思啊?中间隔几个密码子之后再出现的话算是连续吗?还有,专门表达稀有密码子过多的宿主细胞都有哪些啊?
6楼2012-07-03 13:33:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

758836596

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Marado at 2012-07-03 13:43:54
连续的AT或者GC
宿主细胞可以选择Rosetta系列的菌株...

谢谢啦,实在不行我就试试吧。
8楼2012-07-03 17:24:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plumplumgxc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是构建载体时用的序列的问题,pMal应该不难做的。回头检查一下是不是有低级错误
科研这条道不好走啊。。。
9楼2012-07-04 10:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

758836596

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by plumplumgxc at 2012-07-04 10:57:00
应该是构建载体时用的序列的问题,pMal应该不难做的。回头检查一下是不是有低级错误

好的,谢谢啦,我回头仔细核对一下。
10楼2012-07-04 19:09:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 758836596 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 化学调剂0703 +7 啊我我的 2026-03-11 7/350 2026-03-15 23:03 by 凌千颂111
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:06 by tranquil_ya
[考研] 288求调剂 +14 王晓阳- 2026-03-09 19/950 2026-03-14 02:05 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学,英一数二305分求调剂,四六级已过 +8 小小番的茄 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:53 by JourneyLucky
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 求调剂,一志愿江南大学环境工程085701 +3 Djdjj12 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:31 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 0805,333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[基金申请] 提交后的基金本子,已让学校撤回了,可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
信息提示
请填处理意见