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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 重组蛋白前面会不会有其他的氨基酸残基
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瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组蛋白前面会不会有其他的氨基酸残基

用pic9k重组了一个蛋白，转到毕赤酵母里，诱导表达后只有一条带，想去鉴定一下是不是自己要的蛋白，做N端测序的话，不知道会不会在我目标序列的前面留有几个别的氨基酸序列（我是只载体上的序列会不会有个别的翻译成氨基酸？
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我自诩一只猪
1楼 2011-11-14 00:44:14
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凡夫俗子

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

This could not be happened in your experiment.
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2楼2011-11-14 11:02:21
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瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凡夫俗子 at 2011-11-14 11:02:21:
This could not be happened in your experiment.

弱弱的问一句：为啥？启动子后面的一段不会翻译么？
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我自诩一只猪
3楼2011-11-14 21:20:56
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没做过酵母的重组蛋白。在E colli里重组蛋白的话，启动子区域内第一个起始密码子之后的序列会被翻译成蛋白，你找下你用的vector的序列信息自己对一下就好了
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摒气动方息，宁神心自明。
4楼2011-11-15 08:12:32
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cpubiopharm

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

瞎眼猪猪(金币+5): 那从哪可以得到pic9k的全序列呢？ 2011-11-15 11:26:10
瞎眼猪猪(金币+5): 那从哪可以得到pic9k的全序列呢？ 2011-11-15 11:26:12
这个看你怎么设计的啦，如果用了载体的ATG，后面又没有相应的切割，很可能在N端会有多余序列。

有的蛋白多一两个氨基酸无所谓，有的对N端序列要求严格，多一个都没活性，这个是个问题。
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我不知道
5楼2011-11-15 09:06:32
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瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cpubiopharm at 2011-11-15 09:06:32:
这个看你怎么设计的啦，如果用了载体的ATG，后面又没有相应的切割，很可能在N端会有多余序列。

有的蛋白多一两个氨基酸无所谓，有的对N端序列要求严格，多一个都没活性，这个是个问题。

载体的ATG是什么？求指教。。。。
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我自诩一只猪
6楼2011-11-15 11:08:45
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瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cpubiopharm at 2011-11-15 09:06:32:
这个看你怎么设计的啦，如果用了载体的ATG，后面又没有相应的切割，很可能在N端会有多余序列。

有的蛋白多一两个氨基酸无所谓，有的对N端序列要求严格，多一个都没活性，这个是个问题。

O(∩_∩)O谢谢~~~知道了~~
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我自诩一只猪
7楼2011-11-15 11:23:10
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啊Q精神

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10, BioEPI+1): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-15 16:36:49
你用什么没切位点 啊？
按Protocol做的话肯定有残留，一般对蛋白活性没影响。
可以在目的基因蛋白加Glu-Lys-Arg-N（N不能是Pro）KEX2酶切位点这样就会产生天然N端。
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8楼2011-11-15 16:09:01
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yidC423R

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

Pic9k expresses secretion protein. You have signal sequence before your protein and it will be  cut when your protein get secreted into the media. Go to Invitrogen website, read the manual.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2011-11-15 18:45:13
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瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 啊Q精神 at 2011-11-15 16:09:01:
你用什么没切位点 啊？
按Protocol做的话肯定有残留，一般对蛋白活性没影响。
可以在目的基因蛋白加Glu-Lys-Arg-N（N不能是Pro）KEX2酶切位点这样就会产生天然N端。

谢谢啊~~已经做到表达这块了，就不返回去了。。。N端酶切位点是那个平末端，对比了一下，大概有6个多余的氨基酸。。。悬赏分已经给出去了。。。级别低给不你了。。。
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我自诩一只猪
10楼2011-11-16 00:57:16
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