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瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组蛋白前面会不会有其他的氨基酸残基

用pic9k重组了一个蛋白,转到毕赤酵母里,诱导表达后只有一条带,想去鉴定一下是不是自己要的蛋白,做N端测序的话,不知道会不会在我目标序列的前面留有几个别的氨基酸序列(我是只载体上的序列会不会有个别的翻译成氨基酸?
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我自诩一只猪
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啊Q精神

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10, BioEPI+1): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-15 16:36:49
你用什么没切位点 啊?
按Protocol做的话肯定有残留,一般对蛋白活性没影响。
可以在目的基因蛋白加Glu-Lys-Arg-N(N不能是Pro)KEX2酶切位点这样就会产生天然N端。
8楼2011-11-15 16:09:01
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凡夫俗子

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

This could not be happened in your experiment.
2楼2011-11-14 11:02:21
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瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 凡夫俗子 at 2011-11-14 11:02:21:
This could not be happened in your experiment.

弱弱的问一句:为啥?启动子后面的一段不会翻译么?
我自诩一只猪
3楼2011-11-14 21:20:56
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没做过酵母的重组蛋白。在E colli里重组蛋白的话,启动子区域内第一个起始密码子之后的序列会被翻译成蛋白,你找下你用的vector的序列信息自己对一下就好了
摒气动方息,宁神心自明。
4楼2011-11-15 08:12:32
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