应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 重组蛋白前面会不会有其他的氨基酸残基
121/2返回列表12下一页
查看: 2214  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组蛋白前面会不会有其他的氨基酸残基

用pic9k重组了一个蛋白，转到毕赤酵母里，诱导表达后只有一条带，想去鉴定一下是不是自己要的蛋白，做N端测序的话，不知道会不会在我目标序列的前面留有几个别的氨基酸序列（我是只载体上的序列会不会有个别的翻译成氨基酸？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我自诩一只猪
1楼 2011-11-14 00:44:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凡夫俗子

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

This could not be happened in your experiment.
赞一下 回复此楼
2楼2011-11-14 11:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凡夫俗子 at 2011-11-14 11:02:21:
This could not be happened in your experiment.

弱弱的问一句：为啥？启动子后面的一段不会翻译么？
赞一下 回复此楼
我自诩一只猪
3楼2011-11-14 21:20:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没做过酵母的重组蛋白。在E colli里重组蛋白的话，启动子区域内第一个起始密码子之后的序列会被翻译成蛋白，你找下你用的vector的序列信息自己对一下就好了
赞一下 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
4楼2011-11-15 08:12:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpubiopharm

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

瞎眼猪猪(金币+5): 那从哪可以得到pic9k的全序列呢？ 2011-11-15 11:26:10
瞎眼猪猪(金币+5): 那从哪可以得到pic9k的全序列呢？ 2011-11-15 11:26:12
这个看你怎么设计的啦，如果用了载体的ATG，后面又没有相应的切割，很可能在N端会有多余序列。

有的蛋白多一两个氨基酸无所谓，有的对N端序列要求严格，多一个都没活性，这个是个问题。
赞一下 回复此楼
我不知道
5楼2011-11-15 09:06:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cpubiopharm at 2011-11-15 09:06:32:
这个看你怎么设计的啦，如果用了载体的ATG，后面又没有相应的切割，很可能在N端会有多余序列。

有的蛋白多一两个氨基酸无所谓，有的对N端序列要求严格，多一个都没活性，这个是个问题。

载体的ATG是什么？求指教。。。。
赞一下 回复此楼
我自诩一只猪
6楼2011-11-15 11:08:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cpubiopharm at 2011-11-15 09:06:32:
这个看你怎么设计的啦，如果用了载体的ATG，后面又没有相应的切割，很可能在N端会有多余序列。

有的蛋白多一两个氨基酸无所谓，有的对N端序列要求严格，多一个都没活性，这个是个问题。

O(∩_∩)O谢谢~~~知道了~~
赞一下 回复此楼
我自诩一只猪
7楼2011-11-15 11:23:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

啊Q精神

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10, BioEPI+1): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-15 16:36:49
你用什么没切位点 啊？
按Protocol做的话肯定有残留，一般对蛋白活性没影响。
可以在目的基因蛋白加Glu-Lys-Arg-N（N不能是Pro）KEX2酶切位点这样就会产生天然N端。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-11-15 16:09:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yidC423R

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

Pic9k expresses secretion protein. You have signal sequence before your protein and it will be  cut when your protein get secreted into the media. Go to Invitrogen website, read the manual.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2011-11-15 18:45:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瞎眼猪猪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 啊Q精神 at 2011-11-15 16:09:01:
你用什么没切位点 啊？
按Protocol做的话肯定有残留，一般对蛋白活性没影响。
可以在目的基因蛋白加Glu-Lys-Arg-N（N不能是Pro）KEX2酶切位点这样就会产生天然N端。

谢谢啊~~已经做到表达这块了，就不返回去了。。。N端酶切位点是那个平末端，对比了一下，大概有6个多余的氨基酸。。。悬赏分已经给出去了。。。级别低给不你了。。。
赞一下 回复此楼
我自诩一只猪
10楼2011-11-16 00:57:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 瞎眼猪猪 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 20:40 by jyNB2vrbdUpR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 20:31 by jyNB2vrbdUpR
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 uFOAtb1CDngh 2026-09-02 9/450 2026-09-03 20:20 by jyNB2vrbdUpR
[考博] 找导师 +7 yuanjiabao 2026-08-29 8/400 2026-09-03 20:15 by yinnelly
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 9/450 2026-09-03 20:07 by jyNB2vrbdUpR
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +3 jackleilei 2026-09-03 3/150 2026-09-03 19:13 by god_tian
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 18:50 by jyNB2vrbdUpR
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 rFEsUBKXRll0 2026-09-02 6/300 2026-09-03 16:49 by T0rGB46095mJ
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 5/250 2026-09-03 16:38 by T0rGB46095mJ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 10/500 2026-09-03 16:27 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +10 雨打竹帘 2026-08-30 14/700 2026-09-03 13:17 by qsd10086
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 12:03 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭