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paulajjh木虫 (著名写手)
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重组蛋白结合不到ni柱上
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如题，我做一种重组蛋白酶，第一次诱导表达后，蛋白很容易就结合到镍柱上了，用的国产的镍柱；但第二次，就根本结合不上，全部穿过去了，怀疑是镍柱的问题，又更换了GE的填料，还是全部穿过。 各位高手请帮忙分析一下，是什么原因造成的，为什么第一次可以，后来就结合不上了呢？ |
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 蛋白质生物学实验经验 | 【分子生物】EPI帖 | 核酸生物学实验经验 |
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lxj341401
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paulajjh(金币+2): 2011-07-07 08:25:53
西瓜(EPI+1): 追加 2011-07-12 23:29:41
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paulajjh(金币+2): 2011-07-07 08:25:53
西瓜(EPI+1): 追加 2011-07-12 23:29:41
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无非就是填料、缓冲液和蛋白的问题。 1.蛋白：第一次能纯化出来，正常的话标签应该没有什么问题。 2.填料：操作没有问题的话，应该不会出现裂缝之类的，而且即便是有一点，也不会完全纯化不到蛋白。如果不放心，可以重新洗柱、再生，保证填料正常且含有足够的Ni。 3.缓冲液：首先要确定上样和洗脱缓冲液的配置是否正确，如果反了那毫无疑问是纯化不到蛋白的。如果含有破坏Ni的成分当然也不行。 |
7楼2011-07-06 20:58:47
paulajjh
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9楼2011-07-07 08:28:45
paulajjh
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10楼2011-07-07 08:31:02
