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paulajjh

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[求助] 重组蛋白结合不到ni柱上

如题，我做一种重组蛋白酶，第一次诱导表达后，蛋白很容易就结合到镍柱上了，用的国产的镍柱；但第二次，就根本结合不上，全部穿过去了，怀疑是镍柱的问题，又更换了GE的填料，还是全部穿过。
各位高手请帮忙分析一下，是什么原因造成的，为什么第一次可以，后来就结合不上了呢？

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1楼 2011-07-06 11:58:13

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paulajjh

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引用回帖:

Originally posted by zhcosa at 2011-07-06 20:58:47:
无非就是填料、缓冲液和蛋白的问题。
1.蛋白：第一次能纯化出来，正常的话标签应该没有什么问题。
2.填料：操作没有问题的话，应该不会出现裂缝之类的，而且即便是有一点，也不会完全纯化不到蛋白。如果不放心， ...

分析的很全面，但是有以下疑问：
1 会不会标签在第一次中正常，以后两次异常？
2 上样缓冲液中NaCl很低或者没有，会对过柱产生怎样的影响？

另外，还有个问题，有的蛋白是不是会有只能部分结合到镍柱，而其他的直接穿过，且确认不是过载。