| 查看: 4369 | 回复: 24 | |||||
| 本帖产生 3 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
paulajjh木虫 (著名写手)
|
[求助]
重组蛋白结合不到ni柱上
|
||||
|
如题，我做一种重组蛋白酶，第一次诱导表达后，蛋白很容易就结合到镍柱上了，用的国产的镍柱；但第二次，就根本结合不上，全部穿过去了，怀疑是镍柱的问题，又更换了GE的填料，还是全部穿过。 各位高手请帮忙分析一下，是什么原因造成的，为什么第一次可以，后来就结合不上了呢？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 | 【分子生物】EPI帖 | 核酸生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有86人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 组氨酸标签重组蛋白纯化
已经有10人回复
- 重组蛋白前面会不会有其他的氨基酸残基
已经有11人回复
- 关于蛋白重组表达的问题
已经有6人回复
- Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白
已经有23人回复
- 【求助/交流】重组蛋白融合标签的选择
已经有6人回复
- 【求助/交流】重组蛋白表达
已经有9人回复
- 【求助/交流】带GST标签的重组蛋白的纯化？
已经有14人回复
- 【求助/交流】Ni柱洗脱蛋白
已经有6人回复
- 【求助/交流】重组蛋白是红色的，怪事！
已经有22人回复
- 【求助/交流】请问发酵罐发酵会导致重组蛋白降解吗？如何处理呢？
已经有3人回复
- 【求助】重组人蛋白抗体如何检测和检测意义
已经有3人回复
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
2楼2011-07-06 15:18:49
3楼2011-07-06 16:53:00
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MolEPI: 46
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19823
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6621
- 在线: 2794小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
4楼2011-07-06 17:16:31
jieyi
铁虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1430.7
- 帖子: 254
- 在线: 58.8小时
- 虫号: 608041
- 注册: 2008-09-20
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2011-07-06 19:37:49
6楼2011-07-06 20:45:17
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good！ 2011-07-06 21:11:53
paulajjh(金币+2): 2011-07-07 08:25:53
西瓜(EPI+1): 追加 2011-07-12 23:29:41
西瓜(金币+5): Good！ 2011-07-06 21:11:53
paulajjh(金币+2): 2011-07-07 08:25:53
西瓜(EPI+1): 追加 2011-07-12 23:29:41
|
无非就是填料、缓冲液和蛋白的问题。 1.蛋白：第一次能纯化出来，正常的话标签应该没有什么问题。 2.填料：操作没有问题的话，应该不会出现裂缝之类的，而且即便是有一点，也不会完全纯化不到蛋白。如果不放心，可以重新洗柱、再生，保证填料正常且含有足够的Ni。 3.缓冲液：首先要确定上样和洗脱缓冲液的配置是否正确，如果反了那毫无疑问是纯化不到蛋白的。如果含有破坏Ni的成分当然也不行。 |
7楼2011-07-06 20:58:47
paulajjh
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2157.6
- 散金: 282
- 帖子: 1073
- 在线: 89.4小时
- 虫号: 552104
- 注册: 2008-04-28
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2011-07-07 08:25:14
paulajjh
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2157.6
- 散金: 282
- 帖子: 1073
- 在线: 89.4小时
- 虫号: 552104
- 注册: 2008-04-28
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2011-07-07 08:28:45
paulajjh
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2157.6
- 散金: 282
- 帖子: 1073
- 在线: 89.4小时
- 虫号: 552104
- 注册: 2008-04-28
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2011-07-07 08:31:02
投票:
