| 查看: 1556 | 回复: 6 | |||
qzhaiyan木虫 (著名写手)
小胖子
|
[交流]
【求助/交流】Ni柱洗脱蛋白
|
| 我的蛋白以前都是用10和20mM咪唑洗杂蛋白，然后用250mM咪唑洗脱目的蛋白，效果很好。最近不知道为什么我的蛋白在10和20mM咪唑下就洗脱下来了，很奇怪。哪位高手指点一下！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有129人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于用Ni-NTA His.bind树脂纯化原核表达蛋白
已经有16人回复
- 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化
已经有10人回复
- 进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊 ！！！
已经有9人回复
- 如何进一步纯化这个蛋白？
已经有7人回复
- 重组蛋白结合不到ni柱上
已经有24人回复
- Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白
已经有23人回复
- 【求助/交流】求助蛋白过柱后变黄！
已经有6人回复
- 【求助/交流】为什么镍柱纯化可溶性蛋白，电泳结果总是显示不纯呢？
已经有9人回复
- 【求助/交流】蛋白不挂柱怎么办
已经有11人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
- 【求助/交流】SP柱子纯化蛋白，蛋白结合后，用2M NacL都没有洗脱下来，该怎么办？
已经有5人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
2楼2010-08-11 16:24:26
jasco
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1626.1
- 红花: 3
- 帖子: 991
- 在线: 82小时
- 虫号: 287776
- 注册: 2006-10-21
- 专业: 生物化学
3楼2010-08-11 16:37:40
月月大可
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3272.1
- 散金: 1393
- 红花: 17
- 帖子: 1674
- 在线: 295.7小时
- 虫号: 549127
- 注册: 2008-04-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2010-08-11 23:44:48
雪山飞狐7233
铁杆木虫 (著名写手)
铁杆小虫
- MolEPI: 3
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 18825.6
- 散金: 209
- 红花: 44
- 帖子: 1530
- 在线: 199.1小时
- 虫号: 593313
- 注册: 2008-09-05
- 性别: GG
- 专业: 化学计量学与化学信息学
5楼2010-08-12 09:12:17
xuguanghai
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 2841.2
- 散金: 2764
- 红花: 16
- 沙发: 42
- 帖子: 3072
- 在线: 296.7小时
- 虫号: 449061
- 注册: 2007-11-02
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
6楼2010-08-12 09:18:54
sqhnsd
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 515.3
- 散金: 100
- 帖子: 412
- 在线: 56.9小时
- 虫号: 1045397
- 注册: 2010-06-22
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
qzhaiyan(金币+1): 2010-08-12 11:01:33
|
有些蛋白确实会存在这样的情况，在低浓度的咪唑下就会被洗脱下来，跟柱料还有你的蛋白都有关系。你可以这样做，用不含咪唑的binding buffer一直冲洗，知道非特异性结合的蛋白都被清洗干净，然后10 mM接0.5ml,20 mM接1ml，50 mM接1ml,直接250mM接上3-5管，然后都去跑SDS-PAGE去检测那一管比较纯。在低浓度咪唑条件下，杂蛋白还有你的目的蛋白都会被洗脱下来，因此，洗脱的体积要少，不能太多，否则你的蛋白都损失了，这部的目的为了去除杂蛋白。高浓度下收集你的样品，都搜集，然后看看那一管比较纯。 另外提醒：你这个蛋白是不是沉淀里面表达？如果是，你在洗脱的时候是不是没有加urea or sarkosyl?如果没有加，目的蛋白重新沉淀，直接从柱子上掉下来。 |
7楼2010-08-12 09:29:28
