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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助蛋白过柱后变黄！
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suenmomo

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助蛋白过柱后变黄！ 已有4人参与

RT
我用的是大肠Rosetta菌株表达的蛋白（载体是32a，包含Trx）上Ni柱后，50mM咪唑洗脱下目的蛋白，比较杂。不过洗脱下来的溶液却是黄色的，尤其是前2管高峰的，后面的蛋白浓度低的管子里黄色不是很明显，但超滤后黄色明显沉于底部，不明就里，望高手指点!
多谢！
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1楼 2011-03-13 00:16:38
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labrat

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
is it protein complex? please check protocol and protien structure.
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2楼2011-03-13 10:12:46
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lisa68320

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是浓度太大了，稀释一下试试
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-03-13 11:23:53
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suenmomo

金虫 (小有名气)
labrat
不知道指的是什么的复合物呢？我的蛋白形成多聚体的结构已经被我去除了
至于纯化步骤都是通用的，应该没有什么错误
不解

[ Last edited by suenmomo on 2011-3-13 at 11:36 ]
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4楼2011-03-13 11:35:06
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suenmomo

金虫 (小有名气)
lisa68320
就是想浓缩的，然后用肠激酶切
刚开始是800多微克，超滤后把最黄的去除后浓度下降到500微克
不知道黄色的是不是我的蛋白
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5楼2011-03-13 11:37:29
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suenmomo

金虫 (小有名气)
等高人解答！
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6楼2011-03-13 23:31:14
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BioChemCom

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 鼓励发帖交流 2012-01-16 16:36:12
黄色有几种可能性：1. 结合了Fe离子，可能是3价的，或者说结合二价的，在氧气环境下纯化，有氧化现象；2. 有可能结合了一些辅酶；
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2012-01-16 13:27:21
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