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suenmomo

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助蛋白过柱后变黄!已有4人参与

RT
我用的是大肠Rosetta菌株表达的蛋白(载体是32a,包含Trx)上Ni柱后,50mM咪唑洗脱下目的蛋白,比较杂。不过洗脱下来的溶液却是黄色的,尤其是前2管高峰的,后面的蛋白浓度低的管子里黄色不是很明显,但超滤后黄色明显沉于底部,不明就里,望高手指点!
多谢!
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labrat

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
is it protein complex? please check protocol and protien structure.
2楼2011-03-13 10:12:46
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lisa68320

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是浓度太大了,稀释一下试试
3楼2011-03-13 11:23:53
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suenmomo

金虫 (小有名气)

labrat
不知道指的是什么的复合物呢?我的蛋白形成多聚体的结构已经被我去除了
至于纯化步骤都是通用的,应该没有什么错误
不解

[ Last edited by suenmomo on 2011-3-13 at 11:36 ]
4楼2011-03-13 11:35:06
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suenmomo

金虫 (小有名气)

lisa68320
就是想浓缩的,然后用肠激酶切
刚开始是800多微克,超滤后把最黄的去除后浓度下降到500微克
不知道黄色的是不是我的蛋白
5楼2011-03-13 11:37:29
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suenmomo

金虫 (小有名气)

等高人解答!
6楼2011-03-13 23:31:14
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BioChemCom

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 鼓励发帖交流 2012-01-16 16:36:12
黄色有几种可能性:1. 结合了Fe离子,可能是3价的,或者说结合二价的,在氧气环境下纯化,有氧化现象;2. 有可能结合了一些辅酶;
7楼2012-01-16 13:27:21
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