24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3044  |  回复: 23

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

[求助] Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白

本人用镍柱分离带有6个组氨酸标签的重组蛋白,缓冲液是20mM磷酸三钠、500mM氯化钠、10mM咪唑,洗脱缓冲液是250mM咪唑。经过几次层析后发现:我的目的蛋白都穿透了,没有挂住。。。请问大家,这是怎么回事呢?该咋办呢?谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋叶漫漫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


karl2100(金币+1): 谢谢! 2011-05-09 19:05:52
老实人sdu3375(金币+2): 2011-05-12 10:17:32
我没理解你的穿透是哪种意思,呵呵
1,如果是250mM咪唑的洗脱液将你的蛋白洗脱下来的,这是正常的,250的咪唑就是为了洗脱蛋白
2,在10mM的情况下,蛋白就下来了,如果你的测序是正确的,那可能是蛋白的立体结构使His标签没有完全暴露在外,与Ni结合不紧密。
一只小笨鸟,飞呀飞呀飞~
2楼2011-05-09 01:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 秋叶漫漫 at 2011-05-09 01:02:56:
我没理解你的穿透是哪种意思,呵呵
1,如果是250mM咪唑的洗脱液将你的蛋白洗脱下来的,这是正常的,250的咪唑就是为了洗脱蛋白
2,在10mM的情况下,蛋白就下来了,如果你的测序是正确的,那可能是蛋白的立体结构 ...

嗯,您说的这种情况很可能发生。那是不是也有可能和填料有关呢?
3楼2011-05-09 09:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋叶漫漫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

老实人sdu3375(金币+3): 2011-05-12 10:17:39
引用回帖:
Originally posted by 老实人sdu3375 at 2011-05-09 09:10:05:
嗯,您说的这种情况很可能发生。那是不是也有可能和填料有关呢?

可能与Ni柱的载样量有关系,只能挂住一定量的蛋白,剩下的都透过去了。
你们实验室还有人用Ni柱吗?问问他们载样量多大吧。
一只小笨鸟,飞呀飞呀飞~
4楼2011-05-09 16:31:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 秋叶漫漫 at 2011-05-09 16:31:10:
可能与Ni柱的载样量有关系,只能挂住一定量的蛋白,剩下的都透过去了。
你们实验室还有人用Ni柱吗?问问他们载样量多大吧。

我用的是Chelating Sepharose Fast Flow,不知道这个填料怎么样啊?吸附效果是不是不是很好呢?
5楼2011-05-10 09:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Chelating Sepharose Fast Flow哪个公司的?上海生工的停好用的.
6楼2011-05-10 14:47:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋叶漫漫

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 老实人sdu3375 at 2011-05-10 09:55:18:
我用的是Chelating Sepharose Fast Flow,不知道这个填料怎么样啊?吸附效果是不是不是很好呢?

呵呵,不同公司的填料吸附性是有差别的,你的不知道是哪个公司的?最好还是自己试一下,或者,问问别人的经验。呵呵
一只小笨鸟,飞呀飞呀飞~
7楼2011-05-10 19:53:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2011-05-10 14:47:53:
Chelating Sepharose Fast Flow哪个公司的?上海生工的停好用的.

呵呵……GE的~~您用过么?
8楼2011-05-10 22:10:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 秋叶漫漫 at 2011-05-10 19:53:05:
呵呵,不同公司的填料吸附性是有差别的,你的不知道是哪个公司的?最好还是自己试一下,或者,问问别人的经验。呵呵

呵呵……GE的。不知道怎么样呢?
9楼2011-05-10 22:10:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋叶漫漫

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 老实人sdu3375 at 2011-05-10 22:10:34:
呵呵……GE的。不知道怎么样呢?

呵呵,没用过这家的,大公司的说明书比较可信,你看看说明书上对吸附量的描述吧,它写多少,就是多少。
一只小笨鸟,飞呀飞呀飞~
10楼2011-05-11 03:13:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 老实人sdu3375 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 295求调剂 +10 xndjjj 2026-04-04 10/500 2026-04-05 11:19 by 猪会飞
[考研] 312求调剂 +3 Say Never 2026-04-04 3/150 2026-04-05 11:19 by guoweigw
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600,求调剂 +24 吃的不少 2026-04-02 24/1200 2026-04-04 23:20 by 永字号
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:08 by 啵啵啵0119
[考研] 283求调剂 +4 mcbbc 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:51 by imissbao
[考研] 321求调剂 +6 认真求上学 2026-04-03 6/300 2026-04-04 19:51 by dongzh2009
[考研] 求调剂 +6 朔朔话 2026-04-02 7/350 2026-04-04 19:16 by 蓝云思雨
[考研] 280求调剂 +21 咕噜晓晓 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 11:12 by 猪会飞
[考研] 297求调剂 +11 ljy20040718! 2026-04-03 13/650 2026-04-04 09:23 by 来看流星雨10
[考研] 085600材料与化工调剂 +26 kikiki7 2026-03-30 27/1350 2026-04-04 09:18 by qlm5820
[考研] 326分求调剂 +3 于是乎呢 2026-04-01 5/250 2026-04-03 14:23 by 于是乎呢
[考研] 专硕085601求调剂 +7 suyifei 2026-04-03 8/400 2026-04-03 14:00 by 欣喜777
[考研] 321求调剂 +17 y-yh 2026-04-01 20/1000 2026-04-03 12:57 by y-yh
[考研] 调剂 +3 osbbx 2026-04-02 3/150 2026-04-03 07:47 by cc8418
[考研] 一志愿华南师范大学-22408计算机-292分-求华南师范大学调剂 +4 爱读书的小鳄鱼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 18:35 by 求调剂zz
[考研] 农学考研求调剂 +3 dkdkxm 2026-04-01 3/150 2026-04-02 16:04 by wangjagri
[考研] 材料工程322分 +8 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 8/400 2026-04-02 11:53 by 3041
[考研] 化学工程专硕324分,一志愿中国矿业大学求调剂 +7 耿耿1314 2026-04-01 7/350 2026-04-02 07:40 by 尚水阁主
[考研] 292求调剂 +17 木虫er12138 2026-04-01 17/850 2026-04-01 21:37 by 七度不信任
[考研] 285求调剂 +6 AZMK 2026-03-29 9/450 2026-03-30 21:02 by dophin1985
信息提示
请填处理意见