应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 生物制药 » Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白
241/3返回列表123下一页
查看: 2874  |  回复: 23
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

[求助] Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白

本人用镍柱分离带有6个组氨酸标签的重组蛋白，缓冲液是20mM磷酸三钠、500mM氯化钠、10mM咪唑，洗脱缓冲液是250mM咪唑。经过几次层析后发现：我的目的蛋白都穿透了，没有挂住。。。请问大家，这是怎么回事呢？该咋办呢？谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2011-05-06 16:24:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋叶漫漫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢！ 2011-05-09 19:05:52
老实人sdu3375(金币+2): 2011-05-12 10:17:32
我没理解你的穿透是哪种意思，呵呵
1，如果是250mM咪唑的洗脱液将你的蛋白洗脱下来的，这是正常的，250的咪唑就是为了洗脱蛋白
2，在10mM的情况下，蛋白就下来了，如果你的测序是正确的，那可能是蛋白的立体结构使His标签没有完全暴露在外，与Ni结合不紧密。
赞一下(1人) 回复此楼
一只小笨鸟，飞呀飞呀飞~
2楼2011-05-09 01:02:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 秋叶漫漫 at 2011-05-09 01:02:56:
我没理解你的穿透是哪种意思，呵呵
1，如果是250mM咪唑的洗脱液将你的蛋白洗脱下来的，这是正常的，250的咪唑就是为了洗脱蛋白
2，在10mM的情况下，蛋白就下来了，如果你的测序是正确的，那可能是蛋白的立体结构 ...

嗯，您说的这种情况很可能发生。那是不是也有可能和填料有关呢？
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-09 09:10:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋叶漫漫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

老实人sdu3375(金币+3): 2011-05-12 10:17:39
引用回帖:
Originally posted by 老实人sdu3375 at 2011-05-09 09:10:05:
嗯，您说的这种情况很可能发生。那是不是也有可能和填料有关呢？

可能与Ni柱的载样量有关系，只能挂住一定量的蛋白，剩下的都透过去了。
你们实验室还有人用Ni柱吗？问问他们载样量多大吧。
赞一下 回复此楼
一只小笨鸟，飞呀飞呀飞~
4楼2011-05-09 16:31:10
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 秋叶漫漫 at 2011-05-09 16:31:10:
可能与Ni柱的载样量有关系，只能挂住一定量的蛋白，剩下的都透过去了。
你们实验室还有人用Ni柱吗？问问他们载样量多大吧。

我用的是Chelating Sepharose Fast Flow，不知道这个填料怎么样啊？吸附效果是不是不是很好呢？
赞一下 回复此楼
5楼2011-05-10 09:55:18
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Chelating Sepharose Fast Flow哪个公司的?上海生工的停好用的.
赞一下 回复此楼
6楼2011-05-10 14:47:53
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋叶漫漫

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 老实人sdu3375 at 2011-05-10 09:55:18:
我用的是Chelating Sepharose Fast Flow，不知道这个填料怎么样啊？吸附效果是不是不是很好呢？

呵呵，不同公司的填料吸附性是有差别的，你的不知道是哪个公司的？最好还是自己试一下，或者，问问别人的经验。呵呵
赞一下 回复此楼
一只小笨鸟，飞呀飞呀飞~
7楼2011-05-10 19:53:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2011-05-10 14:47:53:
Chelating Sepharose Fast Flow哪个公司的?上海生工的停好用的.

呵呵……GE的~~您用过么？
赞一下 回复此楼
8楼2011-05-10 22:10:09
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 秋叶漫漫 at 2011-05-10 19:53:05:
呵呵，不同公司的填料吸附性是有差别的，你的不知道是哪个公司的？最好还是自己试一下，或者，问问别人的经验。呵呵

呵呵……GE的。不知道怎么样呢？
赞一下 回复此楼
9楼2011-05-10 22:10:34
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋叶漫漫

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 老实人sdu3375 at 2011-05-10 22:10:34:
呵呵……GE的。不知道怎么样呢？

呵呵，没用过这家的，大公司的说明书比较可信，你看看说明书上对吸附量的描述吧，它写多少，就是多少。
赞一下 回复此楼
一只小笨鸟，飞呀飞呀飞~
10楼2011-05-11 03:13:54
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 老实人sdu3375 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭