应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒导入大肠杆菌导不进去，求高手指点
171/2返回列表12下一页
查看: 2848  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

saucemale

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒导入大肠杆菌导不进去，求高手指点

在大肠杆菌感受态细胞中已经转入一个质粒，转进去后涂平板也长菌了，现在把长出的菌体做成感受态细胞再转入第二个质粒，转了几次涂平板都不长，请教是什么原因？
（注：这两种质粒分别含有两种不同的抗性，感受态都是新做的）
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-17 10:36:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

0301nan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
saucemale: 回帖置顶 2012-07-17 15:02:15
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-17 22:23:49
我认为完全可以两个质粒同时转，然后用双抗性的平板进行筛选，我以前做过双抗性的，同时转的，只要涂板的时候多涂一些就可以了。你这样先转一个是不是在转第一个后细胞已经失去了感受态的性质
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

saucemale
5楼2012-07-17 12:43:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你看看这两个质粒兼容不？只是筛选标记不同还不行，还要看复制其实位点。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
3楼2012-07-17 11:26:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

healy13

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-18 13:32:14
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

saucemale
2楼2012-07-17 10:55:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般都是感受态的问题,或者你的转化条件不行.
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

saucemale
coasttocoast。
4楼2012-07-17 11:39:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

saucemale

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-17 11:39:03
一般都是感受态的问题,或者你的转化条件不行.

感受态每天都是新做的，已经做了5次了，不会每次都不行吧
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-17 14:52:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

saucemale

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by healy13 at 2012-07-17 10:55:29
一个质粒？这是什么概念？怎么可能就只转一个！肯定要一定的浓度，才会有转入的几率！
你不长有几个原因：感受态没做成功，可以买现成的商品化的；抗生素用错；转化条件不行，如冰浴，热击的时间和温度~~~等等~~~~

我的意思是我从公司里购买了TOP感受态细胞，然后做质粒转化，结果第一种质粒转进去了，现在我要把已转入质粒的TOP细胞再做成感受态细胞，转入我的第二种质粒，现在为止已经做了5次了，都没有成功（注：TOP是从公司买的大肠感受态细胞）
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-17 14:56:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

saucemale

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 0301nan at 2012-07-17 12:43:04
我认为完全可以两个质粒同时转，然后用双抗性的平板进行筛选，我以前做过双抗性的，同时转的，只要涂板的时候多涂一些就可以了。你这样先转一个是不是在转第一个后细胞已经失去了感受态的性质

我是转进去一种质粒后，看它长出来，验证的确已经转进去以后再把这个菌体做成感受态转第二种质粒的，可是做了好几次就是做不出来，请教啊····
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-17 14:59:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-18 13:32:39
引用回帖:
7楼: Originally posted by saucemale at 2012-07-17 14:56:49
我的意思是我从公司里购买了TOP感受态细胞，然后做质粒转化，结果第一种质粒转进去了，现在我要把已转入质粒的TOP细胞再做成感受态细胞，转入我的第二种质粒，现在为止已经做了5次了，都没有成功（注：TOP是从公司 ...

个人建议啊，将两种质粒一同转化，加双抗，或者只有一种抗性就最好了。因为你将第一种质粒转化进去了，是用的商业化感受态，你第二次再转化的，用的就是你自己做的感受态了，自己做的毕竟赶不上商业化的感受态，所以就影响了你的转化效率。
并且，你将转化后含有质粒的菌来做感受态，容易丢失已经转化进去的质粒。
总之吧，共同转化就结了。嘿嘿
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

saucemale
9楼2012-07-17 16:22:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liangdouxion

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒的不相容性？看看他们的复制起始位点一样吧？
赞一下 回复此楼
毛球
10楼2012-07-17 16:39:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 saucemale 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +3 梨花珞晚风 2026-03-17 3/150 2026-03-17 09:04 by 晗晗调剂上岸
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 化学工程321分求调剂 +10 大米饭！ 2026-03-15 13/650 2026-03-17 06:57 by laoshidan
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-11 7/350 2026-03-17 01:27 by 学员FnSWZj
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +3 大火山小火山 2026-03-16 5/250 2026-03-16 16:54 by barlinike
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 材料与化工专硕调剂 +3 heming3743 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:05 by peike
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭