应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒导入大肠杆菌导不进去，求高手指点
172/2返回列表上一页12
查看: 3236  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还是2个质粒起转吧，双抗性筛选。
赞一下 回复此楼
11楼2012-07-17 18:57:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

通缉要饭

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也觉得同时转是最好的！
赞一下 回复此楼
12楼2012-07-17 19:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-18 13:32:59
查一下你的两个质粒的兼容性：一般来说，两个质粒能够共存的前提是这两个质粒的复制原点是不同的（常见的复制原点包括pBR322 ori, CDF ori 等等）。实验室常用的复制原点都来源于pBR322 ori, ，因而大部分是不能共存的，即使抗性不同，也不能筛选到双抗性的菌株，除非，你使用的两个质粒的复制原点可以兼容（如pBR322 ori 和CDF ori就可以兼容，能够共存）
赞一下 回复此楼
13楼2012-07-17 21:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

saucemale

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by dshlove at 2012-07-17 16:22:11
个人建议啊，将两种质粒一同转化，加双抗，或者只有一种抗性就最好了。因为你将第一种质粒转化进去了，是用的商业化感受态，你第二次再转化的，用的就是你自己做的感受态了，自己做的毕竟赶不上商业化的感受态，所 ...

因为第二种质粒要连接新的片段在上面，商品化的感受态已经用完了，两个质粒同时转，效率很低，总之我会试试的，谢谢你的建议····
赞一下 回复此楼
14楼2012-07-18 10:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

123n

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议：两种质粒一块转，然后分别筛选（首先在一种抗生素上筛，挑单克隆并摇菌，然后涂板在另一种抗生素上筛！！）这样会效果好一些~~~~
赞一下 回复此楼
15楼2012-07-18 10:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

saucemale

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-17 11:39:03
一般都是感受态的问题,或者你的转化条件不行.

感受态每天都是新做的，做了好多次，应该没有问题的，我的转化条件是100ul的感受态细胞加1ul质粒，冰上放置30min，42℃热击90s，冰上放置2min，加900ulLB，37℃摇床180rpm/min一个小时，涂有相应抗性的平板，就是不长菌啊，主要是做感受态的菌之前已经转进去一种质粒，再用这个菌做成感受态会丢失之前的质粒嘛？
赞一下 回复此楼
16楼2012-07-18 10:40:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianchi2952

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by susizheng at 2012-07-17 11:26:12
你看看这两个质粒兼容不？只是筛选标记不同还不行，还要看复制其实位点。

这才回答到点子上！质粒不兼容情况最有可能......
还有就是双抗筛选就ok了.....
赞一下 回复此楼
益学善用
17楼2013-07-04 20:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 saucemale 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] fileCode有新解读？ +7 Tide man 2026-08-08 13/650 2026-08-08 09:47 by zhengxianzb
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 08:59 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:21 by 6vVgjDL4CnGu
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭