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saucemale

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒导入大肠杆菌导不进去,求高手指点

在大肠杆菌感受态细胞中已经转入一个质粒,转进去后涂平板也长菌了,现在把长出的菌体做成感受态细胞再转入第二个质粒,转了几次涂平板都不长,请教是什么原因?
(注:这两种质粒分别含有两种不同的抗性,感受态都是新做的)
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-18 13:32:59
查一下你的两个质粒的兼容性:一般来说,两个质粒能够共存的前提是这两个质粒的复制原点是不同的(常见的复制原点包括pBR322 ori, CDF ori 等等)。实验室常用的复制原点都来源于pBR322 ori, ,因而大部分是不能共存的,即使抗性不同,也不能筛选到双抗性的菌株,除非,你使用的两个质粒的复制原点可以兼容(如pBR322 ori 和CDF ori就可以兼容,能够共存)
13楼2012-07-17 21:31:26
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healy13

禁虫 (小有名气)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-18 13:32:14
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2楼2012-07-17 10:55:29
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你看看这两个质粒兼容不?只是筛选标记不同还不行,还要看复制其实位点。
Thank-you,so-blue.
3楼2012-07-17 11:26:12
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般都是感受态的问题,或者你的转化条件不行.

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coasttocoast。
4楼2012-07-17 11:39:03
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