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质粒导入大肠杆菌导不进去,求高手指点
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saucemale
金虫
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性别: GG
[
求助
]
质粒导入大肠杆菌导不进去,求高手指点
在大肠杆菌感受态细胞中已经转入一个质粒,转进去后涂平板也长菌了,现在把长出的菌体做成感受态细胞再转入第二个质粒,转了几次涂平板都不长,请教是什么原因?
(注:这两种质粒分别含有两种不同的抗性,感受态都是新做的)
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1楼
2012-07-17 10:36:10
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酶切专家
金虫
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专业: 生物大分子结构与功能
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验
2012-07-18 13:32:59
查一下你的两个质粒的兼容性:一般来说,两个质粒能够共存的前提是这两个质粒的复制原点是不同的(常见的复制原点包括pBR322 ori, CDF ori 等等)。实验室常用的复制原点都来源于pBR322 ori, ,因而大部分是不能共存的,即使抗性不同,也不能筛选到双抗性的菌株,除非,你使用的两个质粒的复制原点可以兼容(如pBR322 ori 和CDF ori就可以兼容,能够共存)
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13楼
2012-07-17 21:31:26
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healy13
禁虫
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2012-07-18 13:32:14
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saucemale
2楼
2012-07-17 10:55:29
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susizheng
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专业: 有机合成
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你看看这两个质粒兼容不?只是筛选标记不同还不行,还要看复制其实位点。
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Thank-you,so-blue.
3楼
2012-07-17 11:26:12
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tupac225
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注册: 2011-12-11
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专业: 免疫生物学
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一般都是感受态的问题,或者你的转化条件不行.
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saucemale
coasttocoast。
4楼
2012-07-17 11:39:03
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