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saucemale

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[求助] 质粒导入大肠杆菌导不进去，求高手指点

在大肠杆菌感受态细胞中已经转入一个质粒，转进去后涂平板也长菌了，现在把长出的菌体做成感受态细胞再转入第二个质粒，转了几次涂平板都不长，请教是什么原因？
（注：这两种质粒分别含有两种不同的抗性，感受态都是新做的）

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1楼 2012-07-17 10:36:10

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saucemale

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引用回帖:

4楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-17 11:39:03
一般都是感受态的问题,或者你的转化条件不行.

感受态每天都是新做的，做了好多次，应该没有问题的，我的转化条件是100ul的感受态细胞加1ul质粒，冰上放置30min，42℃热击90s，冰上放置2min，加900ulLB，37℃摇床180rpm/min一个小时，涂有相应抗性的平板，就是不长菌啊，主要是做感受态的菌之前已经转进去一种质粒，再用这个菌做成感受态会丢失之前的质粒嘛？