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saucemale

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[求助] 质粒导入大肠杆菌导不进去，求高手指点

在大肠杆菌感受态细胞中已经转入一个质粒，转进去后涂平板也长菌了，现在把长出的菌体做成感受态细胞再转入第二个质粒，转了几次涂平板都不长，请教是什么原因？
（注：这两种质粒分别含有两种不同的抗性，感受态都是新做的）

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1楼 2012-07-17 10:36:10

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saucemale

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引用回帖:

2楼: Originally posted by healy13 at 2012-07-17 10:55:29
一个质粒？这是什么概念？怎么可能就只转一个！肯定要一定的浓度，才会有转入的几率！
你不长有几个原因：感受态没做成功，可以买现成的商品化的；抗生素用错；转化条件不行，如冰浴，热击的时间和温度~~~等等~~~~

我的意思是我从公司里购买了TOP感受态细胞，然后做质粒转化，结果第一种质粒转进去了，现在我要把已转入质粒的TOP细胞再做成感受态细胞，转入我的第二种质粒，现在为止已经做了5次了，都没有成功（注：TOP是从公司买的大肠感受态细胞）