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saucemale

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒导入大肠杆菌导不进去,求高手指点

在大肠杆菌感受态细胞中已经转入一个质粒,转进去后涂平板也长菌了,现在把长出的菌体做成感受态细胞再转入第二个质粒,转了几次涂平板都不长,请教是什么原因?
(注:这两种质粒分别含有两种不同的抗性,感受态都是新做的)
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-18 13:32:39
引用回帖:
7楼: Originally posted by saucemale at 2012-07-17 14:56:49
我的意思是我从公司里购买了TOP感受态细胞,然后做质粒转化,结果第一种质粒转进去了,现在我要把已转入质粒的TOP细胞再做成感受态细胞,转入我的第二种质粒,现在为止已经做了5次了,都没有成功(注:TOP是从公司 ...

个人建议啊,将两种质粒一同转化,加双抗,或者只有一种抗性就最好了。因为你将第一种质粒转化进去了,是用的商业化感受态,你第二次再转化的,用的就是你自己做的感受态了,自己做的毕竟赶不上商业化的感受态,所以就影响了你的转化效率。
并且,你将转化后含有质粒的菌来做感受态,容易丢失已经转化进去的质粒。
总之吧,共同转化就结了。嘿嘿

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2012-07-17 16:22:11
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healy13

禁虫 (小有名气)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-18 13:32:14
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-07-17 10:55:29
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你看看这两个质粒兼容不?只是筛选标记不同还不行,还要看复制其实位点。
Thank-you,so-blue.
3楼2012-07-17 11:26:12
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般都是感受态的问题,或者你的转化条件不行.

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coasttocoast。
4楼2012-07-17 11:39:03
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