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applezhao

金虫 (小有名气)

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[交流] 提取质粒遇到多条带，求助已有10人参与

大家好，想求助一下大家，我是在BL21里提取的质粒，质粒是PGEX-2T.第一张图是第一次跟第二次提取的结果，我在网上查了一下说可能是提取的过程中不够轻柔，所以我第三次第四次（第二张图）提取的时候注意了这些问题，但是不知道怎么回事，就两管出现了5000bp的片段，实在找不出原因了，求助，谢啦
第一张图7个条带的maker是DL10000，第二张maker也是DL10000

左边是第二次提的质粒右边是第一次提的质粒1.gif

zl1.gif

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命里有时终须有，命里无时莫强求

1楼 2013-11-14 16:54:46

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chjinzhi

银虫 (正式写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-15 10:26:06

提取出来的质粒没有做酶切，直接去跑电泳只能说明你有么有提到质粒。你若要判断它的真实大小，就要先在酶切，然后去跑电泳。
因为，你提取出来的质粒的螺旋程度不一样，条带就会有多条。即使你提出来的质粒只有一种，条带也可能有多条。
所以，你在质粒上选个只有一个酶切位点的酶进行酶切，然后把酶切产物拿去跑电泳。若在5000bp处有条带，就说明你提的是成功的。

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2楼2013-11-14 18:54:05

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zh10246

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做酶切吧

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3楼2013-11-14 19:17:13

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applezhao

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引用回帖:

2楼: Originally posted by chjinzhi at 2013-11-14 18:54:05
提取出来的质粒没有做酶切，直接去跑电泳只能说明你有么有提到质粒。你若要判断它的真实大小，就要先在酶切，然后去跑电泳。
因为，你提取出来的质粒的螺旋程度不一样，条带就会有多条。即使你提出来的质粒只有一种 ...

那我应该还是要先把提取到的质粒胶回收一下再去做酶切吧？还是直接拿提取的质粒做酶切？谢谢啊

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命里有时终须有，命里无时莫强求

4楼2013-11-14 20:56:55

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