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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大提质粒遇到的问题
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gaga123

木虫 (小有名气)

[求助] 大提质粒遇到的问题

最近刚开始做分子生物学，大提质粒，做了几次，用的是天根的大提试剂盒，目录号：DP117，收率有些低，而且每次OD260/OD280nm 都是2.2，这个值太不正常了，可能是什么原因？哪步造成的呢？希望大家帮忙分析分析。上传的图，左边三道是我分别提的质粒的电泳图，另边是Marker。谢谢大家。

1.jpg
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1楼 2012-09-05 09:48:00
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的这个maker是多大的，你提取的质粒大概多大啊？
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持之以恒、永不放弃！
2楼2012-09-05 10:21:22
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monson2008

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要是提的量比较大就不要浪费了，可以把提好的质粒再纯化一遍试试。
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3楼2012-09-05 11:36:03
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gaga123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by monson2008 at 2012-09-05 11:36:03
要是提的量比较大就不要浪费了，可以把提好的质粒再纯化一遍试试。

我现在是想让大家帮忙分析一下原因， 260/280太高了，我大提质粒几次都这样。。。自己也不知道是哪块出问题了。。。谢谢大家。
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4楼2012-09-05 13:05:20
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gaga123: 金币+2, ★有帮助 2012-09-06 15:31:29
跑的时间有点长，个人感觉：前面有条带，即可能有RNA污染；其二，有拖尾现象，即存在DNA少许降解或者蛋白等其它杂质污染的问题。
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5楼2012-09-05 13:21:04
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gaga123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by junminh at 2012-09-05 13:21:04
跑的时间有点长，个人感觉：前面有条带，即可能有RNA污染；其二，有拖尾现象，即存在DNA少许降解或者蛋白等其它杂质污染的问题。

那应该在哪几个步骤中需要注意呢？谢谢。
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6楼2012-09-05 14:19:34
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skmlz87

禁虫 (初入文坛)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gaga123: 金币+2, ★有帮助 2012-09-06 15:31:35
本帖内容被屏蔽
7楼2012-09-05 15:06:57
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-06 13:38:17
gaga123: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-09-06 15:31:13
OD值太高考虑是否为细菌本身RNA或者基因组污染，提取过程中注意P1溶液悬浮细菌要充分，P2碱裂解菌体时间不宜过长，不要超过3分钟，另外这中间不管是我选混匀还是上下颠倒混匀的时候动作要小要轻柔，防止宿主本身基因组和RNA污染质粒，OD值过高一般是这方面的原因，但我个人经验，一般只要按照说明书操作都没有问题，而且实际操作过程中比值在1.7-2.1之间都视为合格，理想状态是1.8-2.0，如果楼主再试一次还是这种情况，建议换盒子，国产的大提质粒盒子质量上普遍有缺陷，建议使用omega或者promega的。
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8楼2012-09-05 15:16:59
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

说明书仔细看下，然后参考下分子生物学实验指南，其实这个问题是个常见问题，并不是很复杂
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9楼2012-09-06 14:46:39
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
果断Qiagen或者Invitrogen
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10楼2012-09-06 16:16:46
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