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大提质粒遇到的问题
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最近刚开始做分子生物学，大提质粒，做了几次，用的是天根的大提试剂盒，目录号：DP117，收率有些低，而且每次OD260/OD280nm 都是2.2，这个值太不正常了，可能是什么原因？哪步造成的呢？希望大家帮忙分析分析。上传的图，左边三道是我分别提的质粒的电泳图，另边是Marker。谢谢大家。 1.jpg |
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gwd0312
木虫 (正式写手)
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2楼2012-09-05 10:21:22
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7楼2012-09-05 15:06:57
huguangdong
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| OD值太高考虑是否为细菌本身RNA或者基因组污染，提取过程中注意P1溶液悬浮细菌要充分，P2碱裂解菌体时间不宜过长，不要超过3分钟，另外这中间不管是我选混匀还是上下颠倒混匀的时候动作要小要轻柔，防止宿主本身基因组和RNA污染质粒，OD值过高一般是这方面的原因，但我个人经验，一般只要按照说明书操作都没有问题，而且实际操作过程中比值在1.7-2.1之间都视为合格，理想状态是1.8-2.0，如果楼主再试一次还是这种情况，建议换盒子，国产的大提质粒盒子质量上普遍有缺陷，建议使用omega或者promega的。 |
8楼2012-09-05 15:16:59
9楼2012-09-06 14:46:39
gongeleven
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10楼2012-09-06 16:16:46