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lijia2054224金虫 (初入文坛)
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请大家帮我分析下我提的质粒怎么这么多条带呀?
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我提的质粒怎么有4条带啊？我想要的是最上面那条弱弱的带，请问质粒是不是不纯呀？是不是有两种质粒存在呀？ ce1,2,4 9-23.jpg |
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 核酸生物学实验经验 |
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gyesang: 回帖置顶 2013-09-28 02:16:28
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| 对于新提的质粒来说，琼脂糖电泳检测的目的是看看有没有提出来，以及所提质粒的质量如何而不是看其大小，由于所提质粒的状态问题如超螺旋质粒、开环质粒和质粒复制中间体，一般会出现3条带，如果质粒提的好会仅出现一条带（为超螺旋，迁移速率最快），但由于每个人实验操作的技术不一样有时也会出现5条带。因此，质粒的实际大小不能用琼脂糖电泳来衡量，而是要通过单酶切线性化或双酶切然后电泳来分析你的质粒是否为你想要的重组质粒。无论你提的质粒跑出来是3条抑或5条带，可能都是你要的东西只是质粒的状态不同罢了，最简单的鉴定方法就是刚才提到的单酶切（可以确认质粒的实际大小，如载体序列5300bp，目的基因1000bp，那么线性化后电泳，其条带位置就在6300bp左右）或双酶切（如载体序列5300bp，目的基因1000bp，那么双酶切后电泳，其条带位置就在5300bp和1000bp各有一条带）。 |
10楼2013-09-24 11:12:57
4楼2013-09-23 19:53:08
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