24小时热门版块排行榜    

查看: 3447  |  回复: 10

lijia2054224

金虫 (初入文坛)

[求助] 请大家帮我分析下我提的质粒怎么这么多条带呀?

我提的质粒怎么有4条带啊?我想要的是最上面那条弱弱的带,请问质粒是不是不纯呀?是不是有两种质粒存在呀?
请大家帮我分析下我提的质粒怎么这么多条带呀?
ce1,2,4 9-23.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

shyh1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lijia2054224: 金币+3, 有帮助 2013-09-24 21:39:13
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-25 08:44:12
gyesang: 回帖置顶 2013-09-28 02:16:28
对于新提的质粒来说,琼脂糖电泳检测的目的是看看有没有提出来,以及所提质粒的质量如何而不是看其大小,由于所提质粒的状态问题如超螺旋质粒、开环质粒和质粒复制中间体,一般会出现3条带,如果质粒提的好会仅出现一条带(为超螺旋,迁移速率最快),但由于每个人实验操作的技术不一样有时也会出现5条带。因此,质粒的实际大小不能用琼脂糖电泳来衡量,而是要通过单酶切线性化或双酶切然后电泳来分析你的质粒是否为你想要的重组质粒。无论你提的质粒跑出来是3条抑或5条带,可能都是你要的东西只是质粒的状态不同罢了,最简单的鉴定方法就是刚才提到的单酶切(可以确认质粒的实际大小,如载体序列5300bp,目的基因1000bp,那么线性化后电泳,其条带位置就在6300bp左右)或双酶切(如载体序列5300bp,目的基因1000bp,那么双酶切后电泳,其条带位置就在5300bp和1000bp各有一条带)。
10楼2013-09-24 11:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小黑L小白

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-25 08:43:57
1 电泳质粒要用超螺旋MAKER。用普通的MARKER是没有参考价值的。
2 不同的试剂盒提出的质粒质量不一样,而且质粒有三条带很正常,分别是线状,环转,和超螺旋三种结构。
3 一般比较严谨的看质粒是进行单酶切,看大小。
4楼2013-09-23 19:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

desheng101

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流! 2013-09-23 18:24:55
楼主第二条带是MAKER吗?
质粒正常状态就是3条带。
楼主是不是大提的?
还有为啥你的点样空那么亮?
2楼2013-09-23 18:03:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijia2054224

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by desheng101 at 2013-09-23 18:03:09
楼主第二条带是MAKER吗?
质粒正常状态就是3条带。
楼主是不是大提的?
还有为啥你的点样空那么亮?

你好,谢谢你。
第一泳道是marker,但是我的marker有点小。
我就是用tiangen提质粒试剂盒提的质粒。
我要的是最上边那条很弱的带。
至于点样孔亮,我也不太清楚。
3楼2013-09-23 18:42:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

desheng101

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lijia2054224: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-24 21:41:34
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-25 08:44:06
给楼主点经验;不一定是你的原因,但是提质粒必须要注意的几点;
1;你提取过程中重悬,裂解,中和这三步极为重要,裂解只要变清就可以直接加中和液。
2;质粒做个单酶切。
3;点样孔的事情问问你们实验室的同学,嘿嘿
5楼2013-09-23 21:22:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淘淘279

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
弱弱的问一下,检测的条带最上边的一条,大小都没对应marker,确定它就是你想要的?

[ 发自小木虫客户端 ]
你能做的永远不止这些!
6楼2013-09-23 21:58:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijia2054224

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by desheng101 at 2013-09-23 21:22:00
给楼主点经验;不一定是你的原因,但是提质粒必须要注意的几点;
1;你提取过程中重悬,裂解,中和这三步极为重要,裂解只要变清就可以直接加中和液。
2;质粒做个单酶切。
3;点样孔的事情问问你们实验室的同学 ...

谢谢你,我做个单酶切试试吧,嘿嘿
7楼2013-09-24 09:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijia2054224

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小黑L小白 at 2013-09-23 19:53:08
1 电泳质粒要用超螺旋MAKER。用普通的MARKER是没有参考价值的。
2 不同的试剂盒提出的质粒质量不一样,而且质粒有三条带很正常,分别是线状,环转,和超螺旋三种结构。
3 一般比较严谨的看质粒是进行单酶切,看大 ...

多谢多谢,做单酶切我还真是没想到,嘿嘿
8楼2013-09-24 09:43:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijia2054224

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 淘淘279 at 2013-09-23 21:58:05
弱弱的问一下,检测的条带最上边的一条,大小都没对应marker,确定它就是你想要的?

嘿嘿,我之前拿空载和这个重组质粒一块跑过,虽然marker还是没有对应上,但应该是那条带的。而且我的载体是单拷贝的,提到的量是很少的。就是这样。
9楼2013-09-24 09:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lijia2054224 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见