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applezhao

金虫 (小有名气)

[交流] 提取质粒遇到多条带,求助已有10人参与

大家好,想求助一下大家,我是在BL21里提取的质粒,质粒是PGEX-2T.第一张图是第一次跟第二次提取的结果,我在网上查了一下说可能是提取的过程中不够轻柔,所以我第三次第四次(第二张图)提取的时候注意了这些问题,但是不知道怎么回事,就两管出现了5000bp的片段,实在找不出原因了,求助,谢啦
第一张图7个条带的maker是DL10000,第二张maker也是DL10000
提取质粒遇到多条带,求助
左边是第二次提的质粒右边是第一次提的质粒1.gif


提取质粒遇到多条带,求助-1
zl1.gif
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命里有时终须有,命里无时莫强求
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applezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 爱的天使13 at 2013-11-14 22:14:32
直接切...

那单酶切的体系你知道吗?我们实验室师姐都是直接双酶切的,不知道单酶切的体系
命里有时终须有,命里无时莫强求
7楼2013-11-14 22:20:11
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chjinzhi

银虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-15 10:26:06
提取出来的质粒没有做酶切,直接去跑电泳只能说明你有么有提到质粒。你若要判断它的真实大小,就要先在酶切,然后去跑电泳。
因为,你提取出来的质粒的螺旋程度不一样,条带就会有多条。即使你提出来的质粒只有一种,条带也可能有多条。
所以,你在质粒上选个只有一个酶切位点的酶进行酶切,然后把酶切产物拿去跑电泳。若在5000bp处有条带,就说明你提的是成功的。
2楼2013-11-14 18:54:05
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applezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chjinzhi at 2013-11-14 18:54:05
提取出来的质粒没有做酶切,直接去跑电泳只能说明你有么有提到质粒。你若要判断它的真实大小,就要先在酶切,然后去跑电泳。
因为,你提取出来的质粒的螺旋程度不一样,条带就会有多条。即使你提出来的质粒只有一种 ...

那我应该还是要先把提取到的质粒胶回收一下再去做酶切吧?还是直接拿提取的质粒做酶切?谢谢啊
命里有时终须有,命里无时莫强求
4楼2013-11-14 20:56:55
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爱的天使13

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by applezhao at 2013-11-14 20:56:55
那我应该还是要先把提取到的质粒胶回收一下再去做酶切吧?还是直接拿提取的质粒做酶切?谢谢啊...

直接切
5楼2013-11-14 22:14:32
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