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ivyvampire

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
搞不好你这个菌种不纯,里面有多种质粒
11楼2013-11-15 10:51:59
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jennifermatt

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提出质粒后直接单切或者双切。
再电泳。
直接质粒电泳出现多条带,也很正常。
求是
12楼2013-11-15 10:53:49
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chjinzhi

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by applezhao at 2013-11-14 20:56:55
那我应该还是要先把提取到的质粒胶回收一下再去做酶切吧?还是直接拿提取的质粒做酶切?谢谢啊...

不用回收,直接去做酶切就行,把酶切产物拿去跑电泳。
13楼2013-11-15 11:00:44
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chjinzhi

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by applezhao at 2013-11-14 22:20:11
那单酶切的体系你知道吗?我们实验室师姐都是直接双酶切的,不知道单酶切的体系...

一样的呀,只不过加入的酶只有一个而已嘛!按照说明书上的体系就行
14楼2013-11-15 11:01:47
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applezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by chjinzhi at 2013-11-15 11:01:47
一样的呀,只不过加入的酶只有一个而已嘛!按照说明书上的体系就行...

今天我做了酶切,发现片段不在5000bp那,在大概6000多bp的地方有条带,我的质粒是5000bp的,这样是不是能确定我提的不是我需要的质粒啊?
命里有时终须有,命里无时莫强求
15楼2013-11-15 21:26:32
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applezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-15 10:27:08
BL21是表达菌株,不适合从BL21里面提取质粒,具体的你可以看看BL21的基因型

我师姐也是从BL21里面提的,她去年大概这个时候提的,已经连接表达出来了,会不会因为时间长质粒变异了啊?
命里有时终须有,命里无时莫强求
16楼2013-11-15 21:29:52
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applezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-11-15 10:51:59
搞不好你这个菌种不纯,里面有多种质粒

我师姐从这个里面都提出来了,很简单按照试剂盒一次就提出来了,不知道为什么我的一直卡在了这
命里有时终须有,命里无时莫强求
17楼2013-11-15 21:31:06
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applezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-15 10:53:49
提出质粒后直接单切或者双切。
再电泳。
直接质粒电泳出现多条带,也很正常。

今天我做了酶切,发现片段不在5000bp那,在大概6000多bp的地方有条带,我的质粒是5000bp的,这样是不是能确定我提的不是我需要的质粒啊?
命里有时终须有,命里无时莫强求
18楼2013-11-15 21:34:17
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带走云彩

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chjinzhi at 2013-11-14 18:54:05
提取出来的质粒没有做酶切,直接去跑电泳只能说明你有么有提到质粒。你若要判断它的真实大小,就要先在酶切,然后去跑电泳。
因为,你提取出来的质粒的螺旋程度不一样,条带就会有多条。即使你提出来的质粒只有一种 ...

正解!
怎知一死生为虚诞?
19楼2014-05-06 19:33:41
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meng_xu

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
首先,BL21是表达质粒,它不是recA mutant,你提取的时候,要记得用PB好好洗。

其次,质粒提取之后,大小不能完全用跑胶判断,一定要做酶切,至于是单还是双还是更多的酶切,由你质粒的酶切图谱决定。

最后,提取质粒,最后是溶解在elution buffer里的,也就是10mM Tris,直接切就可以。
20楼2014-05-07 03:51:15
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