24小时热门版块排行榜    

查看: 3661  |  回复: 19

ivyvampire

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
搞不好你这个菌种不纯,里面有多种质粒
11楼2013-11-15 10:51:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jennifermatt

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提出质粒后直接单切或者双切。
再电泳。
直接质粒电泳出现多条带,也很正常。
求是
12楼2013-11-15 10:53:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chjinzhi

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by applezhao at 2013-11-14 20:56:55
那我应该还是要先把提取到的质粒胶回收一下再去做酶切吧?还是直接拿提取的质粒做酶切?谢谢啊...

不用回收,直接去做酶切就行,把酶切产物拿去跑电泳。
13楼2013-11-15 11:00:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chjinzhi

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by applezhao at 2013-11-14 22:20:11
那单酶切的体系你知道吗?我们实验室师姐都是直接双酶切的,不知道单酶切的体系...

一样的呀,只不过加入的酶只有一个而已嘛!按照说明书上的体系就行
14楼2013-11-15 11:01:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

applezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by chjinzhi at 2013-11-15 11:01:47
一样的呀,只不过加入的酶只有一个而已嘛!按照说明书上的体系就行...

今天我做了酶切,发现片段不在5000bp那,在大概6000多bp的地方有条带,我的质粒是5000bp的,这样是不是能确定我提的不是我需要的质粒啊?
命里有时终须有,命里无时莫强求
15楼2013-11-15 21:26:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

applezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-15 10:27:08
BL21是表达菌株,不适合从BL21里面提取质粒,具体的你可以看看BL21的基因型

我师姐也是从BL21里面提的,她去年大概这个时候提的,已经连接表达出来了,会不会因为时间长质粒变异了啊?
命里有时终须有,命里无时莫强求
16楼2013-11-15 21:29:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

applezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-11-15 10:51:59
搞不好你这个菌种不纯,里面有多种质粒

我师姐从这个里面都提出来了,很简单按照试剂盒一次就提出来了,不知道为什么我的一直卡在了这
命里有时终须有,命里无时莫强求
17楼2013-11-15 21:31:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

applezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-15 10:53:49
提出质粒后直接单切或者双切。
再电泳。
直接质粒电泳出现多条带,也很正常。

今天我做了酶切,发现片段不在5000bp那,在大概6000多bp的地方有条带,我的质粒是5000bp的,这样是不是能确定我提的不是我需要的质粒啊?
命里有时终须有,命里无时莫强求
18楼2013-11-15 21:34:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带走云彩

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chjinzhi at 2013-11-14 18:54:05
提取出来的质粒没有做酶切,直接去跑电泳只能说明你有么有提到质粒。你若要判断它的真实大小,就要先在酶切,然后去跑电泳。
因为,你提取出来的质粒的螺旋程度不一样,条带就会有多条。即使你提出来的质粒只有一种 ...

正解!
怎知一死生为虚诞?
19楼2014-05-06 19:33:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
首先,BL21是表达质粒,它不是recA mutant,你提取的时候,要记得用PB好好洗。

其次,质粒提取之后,大小不能完全用跑胶判断,一定要做酶切,至于是单还是双还是更多的酶切,由你质粒的酶切图谱决定。

最后,提取质粒,最后是溶解在elution buffer里的,也就是10mM Tris,直接切就可以。
20楼2014-05-07 03:51:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 applezhao 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见